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技术文章
角质化组织总蛋白提取试剂盒怎么使用？
点击次数：3272 发布时间：2023/10/9 8:47:21
角质化组织总蛋白提取试剂盒
描述：
动物角质化组织中（包括但不限于毛发，指甲，角，羊毛）蛋白质含量占 80% 。这些组织中
含有很多分子量 10-135KD 不同类型的 α-角蛋白。蛋白质大多数分子量为 10-65KD。传统方法
从角质化组织中提取蛋白质，其缓冲液中通常含有高浓度的尿素，硫脲，盐酸胍等强变性剂，虽
然这些变性剂是比较有效的，但是由于缓冲液与组织比值过大，提取出的蛋白质浓度通常很低，
进一步分析还需浓缩，高浓度变性剂很可能干扰下游实验。本试剂盒无需使用上面提到的强
变性剂，可有效的提取动物角化组织中的蛋白质，提取出的蛋白质无需浓缩，可直接用于 SDS
PAGE。提取缓冲液中含有 0.5%SDS 和其他化学成分。蛋白得率可达 1-2mg/ml。
应用：
可应用于 SDS-PAGE, immunoblottings, ELISA 及其他应用。
试剂盒组分(20T):
1. 15ml 缓冲液 A
2. 1.5ml 缓冲液 B
3. 20 个离心管柱
4. 20 个收集管
运输与储存：
常温运输，室温储存。
重要产品信息
蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后需长时间保存，
建议在缓冲液A中添加蛋白酶抑制剂。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用加入缓冲液
A中。（请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例，例如母液是100x，添加时按照1：100添加，1ml缓冲液A
添加10ul抑制剂）。蛋白浓度测定推荐使用与还原剂兼容的方法测定。
所需附加材料
2-巯ji乙醇（2-ME）
台式离心机
操作方法：
以下操作步骤是从 4-5mg 动物毛发或者从 8-10mg 指甲和角/样品中提取。如果起始量较小，需
调整相应裂解液的用量比例。
1. 蛋白提取，将角化组织切成小片（1-2mm）。
2. 将组织放入 1.5 或 2.0ml 离心管中，加入 400ul Buffer A ，然后加入 20ul 2-巯ji乙醇到管中。
3. 用吸头将组织混匀，确保组织被润湿，A 液可以整个覆盖组织。盖上盖子，55℃，水浴孵育
24 小时。
4. 孵育后，加入 40ul Buffer B 到管中，涡旋震荡几次混匀后倒入离心管柱套管中。组织可以用
200ul 吸头吸到离心管柱中。
5. 台式离心机zui高转速离心 2-3 分钟，弃掉离心管柱，将接收管中的上清液转入新的离心管中
保存即可。蛋白浓度测定可以通过 Bradford 法或使用与还原剂兼容的商业试剂盒测定。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
