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技术文章
实验推荐;骨组织总蛋白提取试剂盒怎么使用？
点击次数：3263 发布时间：2023/9/25 8:51:18
描述：
骨组织通常用于研究的有两种类型：密质骨和松质骨。骨组织中的细胞紧密堆积，由于其独特的结构，
很难有效地从中提取总蛋白质。使用传统的溶液法提取蛋白质如 RIPA 效率低，产率也很低，提取的蛋白质
图谱也是不完整的。本试剂盒利用离心管技术以及优化的裂解液，利用物理研磨和化学裂解相结合，提供了
一种简单和快速的从人或动物骨组织中提取蛋白质的方法。可根据特定的下游应用选择变性裂解液或天
然裂解液。整个过程不到 10 分钟即可完成，蛋白质得率根据骨骼样品类型不同在 0.5-2mg/ml 范围。试剂盒所
提供试剂及耗材可以满足 50 个样品实验。
应用：
用该试剂盒提取的蛋白质可用于许多下游应用，如 SDS-PAGE, WB,IP,ELISA,酶活性测定和蛋白质组学分析。
缓冲剂与 IMAC 树脂兼容，可用于 His 标签蛋白纯化。在质谱分析之需将提取的蛋白质样品中的盐和表面
活性剂除去。
试剂盒组分(50T):
1. 25ml 变性细胞裂解液
2. 25ml 天然细胞裂解液
3. 5g 蛋白提取粉
4.2 根塑料研磨棒
5. 50 个离心管柱
6. 50 个收集管
运输与储存：常温运输，室温储存。
所需附加材料
台式离心机高离心力可到达 14,000-16,000Xg
重要产品信息
1. 变性缓冲液含有离子型表面活性剂和其他化学物质，在低温下容易析出，建议不要在冰上预冷。天然缓冲
液可以预冷，不会析出。裂解缓冲液中不含蛋白酶抑制剂，如果蛋白易水解，建议在使用将蛋白酶抑制
剂 cocktail 添加到缓冲液中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂（罗氏的磷酸酶抑制剂）应在使用加入裂
解缓冲液。（请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例，例如母液是 100x，添加时按照 1：100 添加，1ml
缓冲液中添加 10ul 抑制剂）。测定蛋白质浓度推荐使用 BCA 法测定蛋白浓度。
2. 裂解液的选择要根据下游实验来决定，变性裂解液适合用于 SDS-PAGE，WB 实验，天然裂解液适合用
于 ELISA，IP，CO-IP 等实验。
3. 使用变性裂解液提取的蛋白，做 WB 上样，仍需和 loading buffer 混匀煮制样品。
操作方法：
为实验操作方便，建议大家按照推荐的样品量和裂解液用量。本操作可以按照比例放大或者缩小。蛋白提取
，骨组织需要通过机械手段（骨破碎机，搅拌机，或剪刀等）粉碎成小块或粉末。试着尽可能多地解剖和
去除附着在骨组织上的脂肪和肌肉。室温操作即可。
1.称取 50-100mg（冷冻或新鲜）粉碎的骨组织，放置到离心管柱套管中。
2.加入 50-80mg 蛋白提取粉覆盖组织样品，加入 100ul 裂解液（根据下游实验裂解液二选一）。
3. 立刻用塑料研磨棒反复向下按压扭转研磨组织 2-3min，再加入 100ul 裂解液，继续研磨 30s-1min。注意：
塑料研磨棒可以重复使用，用 70%的酒精彻冲洗干净，用纸巾擦干即可。
4. 盖上盖子，台式离心机 14,000-16,000Xg，离心 1min，弃掉离心管柱。将收集管中的上清转移到一个新管
中，这就是提取的总蛋白。管底的白色沉淀是穿过柱子的蛋白提取粉，弃掉即可。
应用提示：如果终的蛋白质产量低，可将步骤 3 研磨匀浆好的组织在室温下孵育 5-10 分钟后再离心。
在孵育期间，如裂解缓冲液滴入收集管中，是正常现象，不影响提取的蛋白质的质量。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
