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技术文章
实验推荐：植物叶绿体分离试剂盒 如何使用？
点击次数：3233 发布时间：2023/9/20 8:56:52
叶绿体提取试剂盒，由优化叶绿体分离缓冲液和离心管柱及 2.0ml 接收管组成，能够快速从新鲜的
植物组织（叶片，种子，软茎等）中分离出完整的叶绿体。不同于其他分离叶绿体方法，需要 1-10g 甚至更多
样品分离叶绿体，本试剂盒由于使用设计好的特有孔径和厚度的离心管柱，可从 50-200mg 新鲜植物组织中可
获得 1 X 106 to 1 X 107 个完整的叶绿体（大于 90%完整），仅需 5 分钟即可完成。
应用：
Minute TM叶绿体提取试剂盒可快速从小样本量（50-200mg）的新鲜植物组织样品中分离叶绿体。分离的叶绿
体可应用于生化分析、SDS-PAGE、immunoblottings，叶绿体酶测定，可作为 RNA 和 DNA 纯化起始材料用
于分子生物学研究。
试剂盒组分
50T： 4T：
1. 25ml 缓冲液 A 1. 2.0ml 缓冲液 A
2. 25ml 缓冲液 B 2. 2.0ml 缓冲液 B
3. 50 个离心管柱 3. 4 个离心管柱
4. 50 个收集管 4. 4 个收集管
5. 2 根塑料研磨棒 5. 1 根塑料研磨棒
储存：-20 度储存
所需附加材料
台式离心机
1X PBS 或 1X TES 缓冲液
操作方法：
以下步骤是从 100-200mg 植物组织样品中（叶片，种子，软茎等）中分离完整的叶绿体。如果
起始量较大或者较小，需按比例调整裂解液 A 的用量。
实验需将缓冲液 A 和 B 全解冻放置冰上，预冷离心管柱套管。
1.取 100－200mg 新鲜植物组织放入离心管柱套管中。植物叶片样品，卷起或者折叠，剪碎，放
入离心管柱套管中，用 200ul 吸头反复挤压约 100 次减小体积。种子或者软茎样品，用锋利的刀
片将其切成小块放入离心管柱套管中。
2.加入 100ul 预冷的缓冲液 A（注意：缓冲液 A 使用请反复摇匀）。用塑料研磨棒向下按压扭
转研磨 100 次（大概 2-3 分钟）（注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻冲洗干净，用
纸巾擦干）。再加入 300ul 缓冲液 A，用吸头混匀。
3.盖上盖子，4℃，2,000Xg 离心 4 分钟，弃去离心管柱，将接收管中上清液弃去，在沉淀中加
入 500ul 预冷的缓冲液 B，用吸头或涡旋震荡仪重悬沉淀。
4. 4℃，2,000Xg 离心 5 分钟，弃去上清液，保留沉淀（沉淀为分离出的完整叶绿体）。叶绿体沉
淀（注意吹打管壁上的沉淀）可以根据下游实验选择不同的缓冲液重悬，如 PBS，TES 等 buffer。
下游进行蛋白实验推荐使用下表中 MinuteTM系列溶解液溶解叶绿体。做等电聚焦（2D 凝胶一维）我们建议使用：7M 尿素/2M 硫脲/2%Chaps 和 20mM DTT (使用将 DTT 加入以上混合液
中)。
叶绿体进一步纯化（可选优化操作，非必须）
对于大多数样品，按照上述操作得到的叶绿体纯度可以满足绝大部分下游实验。然而一些样品，
如果得到的叶绿体含有过多的碎片，可以使用 Percoll 进行进一步纯化：
1. 在 1.5mlEP 管里加 300ul Percoll 和 700 ul 预冷的 1xPBS 或者 TES，涡悬震荡混匀 10-20s。
2. 用 100ul 1xPBS 或者 TES 重悬第四步中得到的叶绿体沉淀，将得到的重悬液吹到 Percoll 溶
液面上，4℃，11,000Xg 离心 10 分钟。
3. 弃去上清，用 100ul 1xPBS 或 TES 重悬沉在管底的绿色沉淀之后将之转移到一个新的 EP 管
中（不要冲洗管壁的浅绿色组分）。分离的叶绿体可以用 500ul 预冷 1xPBS 清洗沉淀去除残
留的 Percoll
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
