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技术文章
HIV-1 前病毒染料法荧光定量 PCR 试剂盒
点击次数：3622 发布时间：2021/3/24 9:20:31
人类免疫缺陷病毒１型（HIV-１）患者血浆中病毒 RNA 水平直以来是评判抗病毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是，经抗病毒治疗后血浆 HIV-１RNA 已达到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中仍可以检测到 HIV-１原病毒 DNA 的存在，构成病毒储藏库，对清除 HIV-１病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的情况下，HIV-１原病毒 DNA 水平可以作为除 CD4+Ｔ细胞计数和病毒载量之外的另标志物。本公司开发 HIV-1 病毒染料法荧光定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物根据 HIV-1 病毒区设计，特异性高。
3. 荧光定量PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
4. 管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR Magic Mix | 90408 | 500 μL（棕色管） |
| 荧光PCR 用模板稀释液 | 180701 | 1 mL（黄盖） |
| HIV-1 病毒染料法 qPCR 引 物混合液 | 14-22700yw | 100 μL（白盖） |
| HIV-1 病毒染料法 qPCR 阳 性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 60908-22700pc | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 14-22700sc | 1 份 |
| 运输及保存 | 低温运输、-20℃保存，有效期年。 |
| 自备试剂 | DNA 模板、超纯水、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。 |
| 使用方法 | 、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例） 1.注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。 2.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。 3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 用模板稀释液（好用带芯枪头，下同）。 4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备 8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的个是 PC（样品制备阳性对照）， 个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 DNA。
9. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。 7. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 10E4 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
在标记管中按下表加入各成分（本表只列出次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加） |
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
