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技术文章
高通量柱式法细胞总蛋白提取试剂盒 （96孔）
点击次数：3268 发布时间：2023/7/31 10:03:13
高通量柱式法细胞总蛋白提取试剂盒
（96 孔）
目录号:IN-WB96001
描述：
高通量柱式法动物细胞总蛋白提取试剂盒（96 孔）是高通量快速蛋白质提取工具。越来越多的证据
表明常用的 RIPA 裂解液可能引起不可预测的蛋白质丢失，产生很多难以解释的疑难数据。本试剂盒使用柱
式法技术结合优化的裂解液配方可以更有效地提取总蛋白，并有效解决蛋白丢失问题。高通量柱式法总蛋白
试剂盒可以对 96 孔板培养的细胞整板提取总蛋白，也可以对非 96 孔板培养的细胞样品同时提取总蛋白，操
作简单，方便，提取速度快且得率高。
应用：
提取出的总蛋白可应用于 SDS-PAGE，WB 检测，ELISA。
试剂盒组份 (96 次/板):
1. 25ml×2 变性细胞裂解液
2. 1 个 96 孔离心管柱板
3. 1 个 96 孔收集板
4. 1 个 96 孔密封胶垫 （收集板用）
5. 1 片封口贴（离心管柱板用）
**注:试剂盒中的细胞裂解液不含任何还原剂和伯胺。
运输及储存：常温运输，室温保存。
重要产品信息：
1. 高通量 96 孔柱式法动物细胞总蛋白提取试剂盒是一款高通量快速总蛋白提取试剂盒。蛋白酶抑制
剂可根据需求添加，如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。研
究蛋白磷酸化，在使用务必在裂解液中添加磷酸酶抑制剂（例如 罗氏的磷酸酶抑制剂）。（各类抑制剂
的添加方法请按照抑制剂母液比例，例如母液是 100x，添加时按照 1：100 添加，即 1ml 裂解液中添加 10ul
抑制剂）。推荐使用 BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定。
2. 使用变性裂解液提取的蛋白仍需和 loading buffer 混匀煮制样品。
3. 如果发现变性裂解液在低温下出现沉淀，在大于 37 度温度下孵育至沉淀复溶即可使用。
附加材料（自备）：
1 X PBS
板式离心机
操作步骤：
96 孔板贴壁细胞样品总蛋白提取
1. 将 96 孔离心管柱板放到 96 孔收集板上，将这个 96 孔离心管柱套板放在冰上预冷
2. 96 孔贴壁细胞培养至 90-100%融合度，弃去培养基，每孔加入预冷的 PBS 清洗细胞一次，全弃去上清，
可以选用多道移液器操作。
3. 每孔中加入 25-40ul 裂解液，用多道移液器上下吹打混匀。将 96 孔离心管柱套板做好标记后，将细胞裂
解物依次转移到预冷的 96 孔离心管柱套板管中，使用封板膜将离心管柱板密封，将 96 孔离心管柱套板
放入平板式离心机中，4 度，4000rpm，离心 5min。
4. 离心后弃去 96 孔离心管柱板，接收管中即是提取好的总蛋白，样品可用 96 孔密封胶垫盖好冻存于-80 度
冰箱备用。再次使用将 96 孔收集板放于冰上解冻后，4000rpm，4 度，离心 5min，打开胶垫即可取用
蛋白样品。
非 96 孔板培养的细胞样品总蛋白提取
1. 将 96 孔离心管柱板放到收集板上，将这个 96 孔离心管柱套板放在冰上预冷。
2. 贴壁细胞：细胞培养至 90-100%融合度，弃去培养基，加入预冷的 PBS 清洗细胞一次，全弃去上清，
使用胰酶或细胞刮刀将细胞收集到 1.5ml 离心管中，4℃，700Xg 离心 5 分钟，全弃去上清。
非贴壁细胞：低速离心收集细胞，在 1.5ml 离心管中加入预冷的 PBS，500Xg，离心 2-3 分钟清洗细胞一
次，弃去部分上清，保留与细胞体积一致量的 PBS，涡旋震荡重悬细胞。
3. 根据细胞沉淀体积按表格 1 加入适量的裂解液，涡旋振荡混匀以裂解细胞。
请注意：如有部分未全裂解的细胞不会影响样品质量。
表格 1.不同细胞体积应加入相应体积裂解液
细胞沉淀（ul） 裂解液（ul）
3 20
5 50
10 100
10 100
20 200
40 500
注意：以上为通用参考，裂解液的实际量可以根据样品不同增加或减少
4. 将样品及 96 孔离心管柱套板对应做好标记后，依次将细胞裂解物转移到预冷的 96 孔离心管柱套板管
中，使用封板膜将离心管柱板密封，将 96 孔离心管柱套板放入平板式离心机中，4 度，4000rpm，离心
5min。
5. 离心后弃去 96 孔离心管柱板，接收管中即是提取好的总蛋白，样品可用 96 孔密封胶垫盖好冻存于-80
度冰箱备用。再次使用将 96 孔收集板放于冰上解冻后，4000rpm，4 度，离心 5min，打开胶垫即可取
用蛋白样品。
本品仅供研究使用，不可用于临床诊断。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
