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技术文章
免疫组化问题解答
点击次数：3643 发布时间：2021/3/11 9:31:05
1、染色过强？
- 原 因
- 解决方法
- 抗体浓度过高或孵育时间过长
- 降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜
- 孵育温度过高超过37度
- 般在室温20-28度
- DAB显色时间过长或浓度过高
- 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准
2、非特异性背景染色？
- 原 因
- 解决方法
- 操作过程中冲洗不充分
- 每步冲洗3次每次5分钟
- 组织中含过氧化物酶未阻断
- 可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长
- 组织中含内原性生物素
- 正常非免疫动物血清再封闭
- 血清蛋白封闭不充分
- 血清蛋白封闭不充分
3、染色弱？
- 原 因
- 解决方法
- 抗体浓度过低、孵育时间过短
- 提高抗体浓度、孵育时间不能少于60分钟
- 试剂超过有效使用时间
- 应更换试剂
- 操作中添加试剂时缓冲液未沥干
- 每步滴加试剂沥干切片中多余的缓冲液
使试剂稀释 （应防止切片干燥） - 室温太低，低于15度
- 要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4度冰箱过夜
- 蛋白封闭过度
- 封闭不要超过12分钟
4、染色阴性？
- 原 因
- 解决方法
- 操作步骤错误
- 应重试，设阳性对照
- 组织中无抗原
- 设阳性对照以验证试验结果
- 抗与二抗种属连接错误
- 仔细确定抗二抗种属无误
标记染料 AP APC FITC Cy3 Cy5 Biotin PE-Cy3 PE-CY5 Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488
PE HRP Gold Cy5.5 Cy7 RBITC PE-CY5.5 PE-CY7 Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 594
Alexa Fluor 647
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
