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非蛋白巯基测定试剂盒说明书
点击次数：3634 发布时间：2021/1/13 9:30:07
非蛋白巯基测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后加入4mL甲醇，室温震荡10min，然后10000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）然后10000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
3. 血清、培养液：取0.1mL，加0.4mL甲醇，室温震荡10min，然后10000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 样品（μL） | 40 | 40 |
| 试剂（μL） | 150 | 150 |
| 试剂二（μL） |
| 10 |
| H2O（μL） | 10 |
|
| 混匀，25℃静置，于微量石英比色皿/96孔板，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。 | ||
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y =1.7236 x，R2=0.9994
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
