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技术文章
谷氨酰胺酶( GLS) 活性测定试剂盒
点击次数：3649 发布时间：2021/1/12 10:12:06
谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和
氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶
活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰
和双蒸水。
试剂组成和配制：
试剂×2 瓶，60 mL，4 ℃保存；
试剂二×1 瓶，40 mL，4 ℃保存；
试剂三×1 瓶，60 mL，常温保存；
试剂四×1 瓶，5 mL，常温保存；
试剂五×1 瓶，3 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，3 mL，常温避光保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：试剂体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试
剂），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）：
试剂名称（uL）
测定管
对照管
样本
25
蒸馏水
25
试剂
100
100
试剂二
400
400
混匀，37℃水浴 1 小时
试剂三
525
525
混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂
上清液
130
130
试剂四
30
30试剂五
20
20
试剂六
20
20
混匀，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做
管。
酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA -0.1301)
2、组织、细菌或细胞 GLS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每 mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每 g 组织每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /g 鲜重）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 样总) ÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /104 cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 样总)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：
样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /mL）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷T=726.2×(ΔA -0.1301)
2、组织、细菌或细胞 GLS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每 mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /mg prot）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=726.2×(ΔA -0.1301)÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每 g 组织每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /g 鲜重）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 样总) ÷T=726.2×(ΔA -0.1301)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol 氨定义为个酶活力单位。
GLS（μmol /h /104 cell）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 样总)÷T =1.4524×(ΔA -0.1301)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：
样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
