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技术文章
多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒
点击次数：3725 发布时间：2021/1/6 9:21:09
多聚半乳糖醛酸酶（ploygalacturonase，PG）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半
乳糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和
花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜域
具有较高的研究价值。
测定原理
多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红
棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶
活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂：液体 8mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2．细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，
总时间 3min）；然后 16000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3．培养液：直接检测。
测定操作表
对照管 测定管
样本（μL） 20
煮沸样本（μL） 20
试剂（μL） 80 80
40℃水浴 30min
试剂二（μL） 100 100
沸水浴 5min，冰浴或自来水冷却，于微量石英比色皿/96 孔板测定 540nm
处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。
酶活性计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1544x - 0.1537，R
2
= 0.9996
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸
为个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mg prot）=
0.1544
A 0.1537
×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 129.53×(△ A+0.1537)÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为
个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/g）=
0.1544
A 0.1537
×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T
= 129.53×(△ A+0.1537)÷W
3．按液体体积计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mL）=
0.1544
A 0.1537
×V 反总÷V 样÷T=129.53×(△ A+0.1537)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/104
cell）=
0.1544
A 0.1537
×V 反总÷V 样÷T=129.53×(△ A+0.1537)
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0772x - 0.1537，R
2
= 0.9996
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸
为个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mg prot）=
0.0772
A 0.1537
×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 259.06×(△ A+0.1537)÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为
个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/g）=
0.0772
A 0.1537
×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T
= 259.06×(△ A+0.1537)÷W
3．按液体体积计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/mL）=
0.0772
A 0.1537
×V 反总÷V 样÷T= 259.06×(△ A+0.1537)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/104
cell）=
0.0772
A 0.1537
×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 259.06×(△ A+0.1537) ÷ 细胞数量
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h
注意事项
1. 测定之请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样
本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
2. 煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
