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技术文章
总抗氧化能力 (ABTS 法)试剂盒说明书
点击次数：3901 发布时间：2023/5/31 8:45:36
总抗氧化能力 (ABTS 法)试剂盒说明书
货号：YX-C-ABTS
规格：50T/48S
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
研究意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常 常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各 种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
ABTS 法是使用广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS 经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS+ ，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在 734nm 处有大吸收。被测物质加入 ABTS+ 溶液后，所含抗氧化成分能与 ABTS+ 发生反应而使反 应体系褪色。在 734nm 检测吸光度的变化，并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗 氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。
样品的制备：
( 1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆 (制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝) 4℃ ，5000rpm 离心 10min ，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存 (不宜超过 30 d) 后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量 (g) ：提取液体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例 (建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 提取液) 进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量 (104 个) ：提取液体积 (mL) 为 500~ 1000：1 的比例 (建议 500 万细胞加入 1mL 提取液) ，冰浴超声波破碎 (功率 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次) ；10000g ， 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1 、 分光光度计预热 30min ，调节波长至 734nm。
2 、 工作液的配置：临用取试剂二一瓶，加入 25mL 试剂一，震荡混匀 20min 后，静置， 取上清使用。 (注意，现配现用)
3 、操作表 (在 EP 管中反应)
|
| 空白管 | 测定管 |
| 提取液 (μL) | 50 |
|
第 1 页 共 2 页
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
| 样品 (μL) |
| 50 |
| 工作液 (μL) | 950 | 950 |
| 充分混匀，10min 内测定 734nm 吸光值，△A= A 空白-A 测定 | ||
注意：空白管只需测定一次，吸取工作液时不要吸到底部沉淀，若A 测定小于 0.4 ，需用提取 液稀释后检测。
总抗氧化能力计算公式：
1 、以自由基清除率表示：
ABTS 自由基清除率 (％) = (A 空白-A 测定) ÷A 空白× 100％
2 、以标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量表示：
标准曲线：y = 1.4042x - 0.0012 R2 = 0.9985 x:Trolox 浓度(μmol/mL)
y:吸光值差值△A
单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox 的量来表示样本的ABTS 自由基清除能力。 (1) 按样本质量计算
总抗氧化能力 (μmol Trolox/g 鲜重) = (△A+0.0012) ÷1.4042×V 样÷(V 样÷V 样总×W)
=0.712× (△A+0.0012) ÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力 (μmol Trolox/mg prot) = (△A+0.0012) ÷1.4042×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr) =0.712× (△A+0.0012) ÷Cp r
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力 (μmol Trolox/ 104cell) = (△A+0.0012) ÷1.4042×V 样÷ (V 样÷V 样总×细胞 数量 (万个) )
= 0.712× (△A+0.0012) ÷ 细胞数量 (万个)
(3) 按液体体积计算
总抗氧化能力 (μmol Trolox/mL) = (△A+0.0012) ÷1.4042
=0.712× (△A+0.0012)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；W：样品质量，g；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1. 尽量避免使用在中碱性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产 生干扰。
2. 样品中不宜添加Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和DTT 、巯基乙醇等影响氧化还原反 应的还原剂。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
