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技术文章
IHC之石蜡切片16种常见问题全解析
点击次数：3669 发布时间：2020/12/14 10:15:36
样本的制备是IHC实验成功的提条件。样本完成石蜡包埋后，需要成约3-4um的薄片。本文主要介绍了切片小技巧及过程中容易出现的16种问题
切片小技巧
②切片厚度3-4μm（淋巴结、扁桃体、鼻咽、扁桃体2-3μm；脂肪5-6μm）
④切片动作轻，用力均匀。
⑥刀片锋利，切片角度5°，切片平整无褶皱和收缩。
⑧蜡块表面有钙点，应20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。
切片光面朝下展片、捞片。
摊片水温利于展平又不熔化，必要时用20%酒精摊片。
细小组织（穿刺、内镜小标本）可以多贴几个。
在烘烤切片应做好排水，烤片温度高于石蜡熔点5-10℃。
问题1 细胞皱缩和收缩；核“起泡”变大损伤；胶原染色嗜碱性
原因：石蜡温度过高。
解决方法：烤箱温度高于石蜡熔点5-10℃为佳。
问题2 切片卷成致密团
原因：①刀钝；②倾斜角太小；③切片太厚。
解决方法：①换新刀片；②如果间隙角充分，降低倾刀的斜度。
①组织固定、脱水、透明不彻底，浸蜡不透；浸蜡包埋温度过高或时间过久。
解决方法：问题4过分的压缩
原因：刀片钝；组织或石蜡过软；用力太猛，速度太快。
解决方法：②③
原因：刀刃不锋利，刀间隙角度大；蜡块内组织上下端留蜡边太少或不整齐，刀边碎片；室温过低或石蜡过硬。
移动刀口或更换刀片，检查刀的角度，清洁刀片和刀架背面；在低熔点的石蜡中重新包埋；提高室内温度或温暖蜡块表面（哈气等）；切片厚度适宜（根据组织类型）。
①②③④①②③④水，开启加湿器；问题7 切片条带弯曲不直
原因：②蜡块下边与刀口不平行；④组织本身硬度不致。
③移动刀片或更换刀片；问题8 蜡块组织脱落
原因：②蜡块冻时间过长，切片时易出现蜡块脱落现象。
②切片动作小、匀速。
①取材时未取中病灶，组织块太大，太厚；③组织块内组织不平坦；⑤切片时粗修过多（切削过深）或过少（没切到足够的深度）。
解决方法：②组织在包埋模中均匀铺平；④切片方向：软到硬，易到难，主到次。
①切片机维护不当，切片厚度设置错误；③石蜡过热；解决方法：①降低切片厚度设置；③使用适合组织类型和密度熔点的石蜡；问题11 切片纵裂，损伤，刀痕
原因：②刀片缺口；④石蜡中有杂质。
①更换刀片或移动刀口；③仔细清洁刀刃以除去多余的石蜡堆积；问题12 切片厚薄不均匀/刀/百叶窗/搓衣板
原因：②切片刀不锋利，刀间隙角（或倾斜度）太大；④切片机部件松动或磨损；⑤组织致密或坚实；⑥主轴伸出太长。解决方法：②更换刀片，减少倾斜度；④均速慢切；⑥主轴摇回复原。
①摊片温度不合适，组织未充分伸展；③石蜡熔点低，过软或室温较高；④组织缺乏致性。
①调小刀角度，边切边向蜡块吹气用10-20%酒精摊片，利用浓度差，水的张力来展片；③更换刀片或移动刀口；问题14 切片裂缝/碎裂
原因：②摊片水温过高，摊片时间长导致过度延伸；④烤片切片排水不净。
解决方法：②在摊片时轻轻延伸蜡带，去除褶皱和折叠；④在切片和漂片过程中，小心操作蜡带；问题15 栅状裂和龟裂
原因：②摊片水温过高；④切片过程中过度冷冻。
解决方法：②降低摊片水温；④匀速慢切，边切边对蜡块吹气。
捞片时切片下面有气泡。
解决方法：②切片要干净无污染；③捞片将组织下的气泡赶走
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
