当前位置：阿仪网>上海雅吉生物科技有限公司>技术文章>冷冻切片的方法及注意事项
企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：9年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：7955499
手机网站：http://wap.app17.com/c137908/
旗舰版网址：http://www.yajiml.com
技术文章
冷冻切片的方法及注意事项
点击次数：3547 发布时间：2020/12/14 10:03:42
、实验准备
1、清理实验台及仪器
2、开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*）
3、准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药
二、取材
解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不的空泡,使细胞内结构移位。
注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度好不要超过 3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
三、冷冻切片
1、取出组织支承器，放平摆好组织，边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，般在5 ～10μm间。
4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着个方向稍微用力轻轻带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或 OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。）
②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织围再加些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
③冷冻箱及冷冻头的温度高低，要根据不同的组织而定。温度过低会导致组织块过硬,切片碎裂,出现梯田状薄厚不均或空洞;反之,温度过高,组织块硬度不够 ,切片不易成形或成皱褶。数据图1供参考。
④当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。
⑤用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在起时，分子彼此间发生转移而产生了种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
