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技术文章
鸡新城疫血凝抑制试验抗原阳性血清与阴性血清说明书
点击次数：4403 发布时间：2020/12/10 9:16:30
鸡新城疫血凝抑制试验抗原阳性血清与阴性血清说明书
兽用非处方药
【兽药名称】
通用名称：鸡新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
英文名称：Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen，Positive Sera ａnd Negative Sera
汉语拼音：Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan，Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】
抗原含有灭活的鸡新城疫病毒，血凝效价应≥1:512。阳性血清为鸡新城疫高免的SPF鸡血清，HI效价应≥1:512。阴性血清为SPF鸡血清。
【性状】
抗原为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解；阳性血清和阴性血清均为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体。
【用法与判定】
鸡新城疫血凝抑制试验抗原阳性血清与阴性血清说明书
1 血凝（HA）试验操作方法
1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS溶液。
1.2 第1孔加入0.025ml抗原，依次作0.025ml的对倍稀释至第11孔；为精确计算血凝单位，病毒悬液开始需作一系列密集稀释，如1/3、1/4、1/5、1/6等。
1.3 每孔加0.025ml PBS溶液。
1.4 每孔加0.025ml 1%（V/V）鸡红细胞悬液。
1.5 将反应板在振荡器上振荡1~2分钟或轻叩反应板混合反应物，室温（20~25℃）静置15~30分钟或2~8℃ 45~60分钟，当对照孔的红细胞显著呈纽扣状时判定结果。
1.6 结果判定 将反应板倾斜60°，观察红细胞有无呈泪珠样流淌，完全无泪珠样流淌（100%凝集）的最高稀释倍数为血凝效价。表示1个HA单位（HAU），再根据开始的稀释倍数精确计算血凝效价。
2 血凝抑制（HI）试验操作方法
2.1 根据HA测定的效价，计算配制4个血凝单位（4HAU）抗原。
2.2 反应板中每孔加入0.025ml PBS。
2.3 第1孔中加入0.025ml血清。
2.4 在反应板上将血清做横向0.025ml的对倍稀释，至第10孔。
2.5 在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室温下（20~25℃）静置30分钟或2~8℃ 45~60分钟。
2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，轻晃混匀后，室温（20~25℃）静置20~40分钟或2~8℃ 45~60分钟，当对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
2.7 结果判定 以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性血清效价不高于1:4时，试验方可成立。被检样品HI效价≤1:4判为阴性；等于1:8判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥1:8判为阳性，＜1:8判为阴性）；≥1:16判为阳性。
【注意事项】
鸡新城疫血凝抑制试验抗原阳性血清与阴性血清说明书
（1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件，准确控制红细胞悬液和抗原工作浓度，同时应严格控制温度和作用时间。
（2）用pH值7.0~7.2的PBS作稀释液。
（3）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。
（4）使用时应先测抗原的血凝价，根据所测结果，配制4个血凝单位的抗原，配好后的抗原应在2小时内用完。
（5）抗原开封后2~8℃保存，应不超过3个月。切忌反复冻融。
【贮藏与有效期】 2~8℃保存，抗原、阳性血清和阴性血清有效期均为24个月。
鸡新城疫血凝抑制试验抗原阳性血清与阴性血清说明书
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
