企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
90成长值
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：9年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：7955499
手机网站：http://wap.app17.com/c137908/
旗舰版网址：http://www.yajiml.com
技术文章
锰过氧化物酶试剂盒说明书 微量法
点击次数：3445 发布时间：2020/11/27 9:46:12
锰过氧化物酶（Manganese peroxidase ，Mnp）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，
属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、
DTT，多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在Mn
2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸
收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水
浴锅。
试剂组成和配制
试剂一：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。
试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 2mL×1 支，4℃保存。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂
一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（10
4个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞
加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；
然后 4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
测定操作
对照管 测定管
试剂一（μL） 120 100
试剂二（μL） 20
试剂三（μL） 40 40
样品（μL） 20 20
试剂四（μL） 20 20
充分混匀，于30℃反应10min，于微量石英比色皿/96孔板，测定465nm处吸光值，记为A对照管
和A测定管，△A=A测定管-A对照管
酶活计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 83×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 83×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每10
4个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/10
4cell）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 83×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/L）=△A÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T= 8.3×10
4×△A
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；
V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；T：反应时间，10min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 166×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 166×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每10
4个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/10
4cell）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 166×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/L）=△A÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T= 1.66×10
5×△A
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，
1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，
mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10min
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
