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技术文章
植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒说明书
点击次数：3538 发布时间：2020/11/26 9:56:07
规格：100管/96样
植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒说明书
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义
植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。
测定原理
叶绿素 a 和叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素 a 和叶绿素 b 以及总叶绿素含量。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、10mL 玻璃试管，锡箔纸。
试剂组成和配制
提取液：液体 1000mL×1瓶，4℃保存。（自备，无水乙醇：丙酮=1:2）。
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。
测定操作
1. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约 0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。
2. 加入 1mL 蒸馏水，少量试剂一（约 50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入 10mL玻璃试管。
3. 用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液补充至 10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。
4. 取浸提液 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，提取液调零，测定 663nm 和 645nm 处吸光值，分别记为A663 和A645 。
计算公式
微量石英比色皿计算方法：
叶绿素a含量（mg/g）=（12.7× A663-2.69×A645）×V 提×D÷m÷1000
= 0.01×（12.7×A663-2.69×A645）×D÷m
叶绿素b含量（mg/g）=（22.9×A645-4.68×A663）×V 提×D÷m÷1000
= 0.01×（22.9×A645-4.68×A663）×D÷m
叶绿素总含量（mg/g）=（20.21×A645+8.02×A663）×V 提×D÷m÷1000
= 0.01×（20.21×A645+8.02×A663）×D÷m
V 提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g
96孔板计算方法：
叶绿素a含量（mg/g）=2×（12.7× A663-2.69×A645）×V 提×D÷m÷1000
= 0.02×（12.7×A663-2.69×A645）×D÷m
叶绿素b含量（mg/g）=2×（22.9×A645-4.68×A663）×V 提×D÷m÷1000
= 0.02×（22.9×A645-4.68×A663）×D÷m
叶绿素总含量（mg/g）=2×（20.21×A645+8.02×A663）×V 提×D÷m÷1000
= 0.02×（20.21×A645+8.02×A663）×D÷m
V 提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g
注意事项
1. 色素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2. 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。
3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。
4. 测定时吸光值超过 1，可进行适当稀释。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
