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技术文章
马伊氏锥虫(T.evans)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
点击次数：3356 发布时间：2023/4/7 9:26:52
马伊氏锥虫(T.evans)酶联免试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定马血清、血浆及相关液体样本中伊氏锥虫(T.evans)表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中马伊氏锥虫(T.evans)表达。用纯化的抗体包被微孔 板，制成固相抗体，可与样品中伊氏锥虫(T.evans)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其 他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻洗涤后加 底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。 用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度 (OD 值) ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中马 伊氏锥虫(T.evans)的存在与否。
试剂盒组成
| 1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 阳性对照 | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 阴性对照 | 0.5ml×1 瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
标本要求
1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 (HRP) 活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照 1 孔 (空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl 。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应 (此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (OD 值) 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
临界值 (CUT OFF) 计算：临界值=阴性对照孔平均值+0. 15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值 (CUT OFF) 者为伊氏锥虫(T.evans)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值 (CUT OFF) 者为伊氏锥虫(T.evans)阳性
。
注意事项
1 ．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。
3 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物请避光保存。
6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须 注意安全。
保存条件及有效期
1 ．试剂盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 个月
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
