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技术文章
人真皮成纤维细胞的分离培养制备方式
点击次数：3601 发布时间：2020/2/12 10:12:50
真皮成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织，真皮成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞，由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。
一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。
以下是赛百慷提供的一种人真皮成纤维细胞的制备方式（仅供参考）：
1.首先在分离真皮成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行，打开生物安全柜紫外灯30min作无菌处理。
2.将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精，消毒2min，
3.将皮肤组织置含P/S的PBS中清洗至少3遍，
4.然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等，
5.将皮肤剪成0.5*0.5 cm小块，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱过夜消化，
6.第二天，用镊子将表皮与真皮分开（薄的那层是表皮，厚的那层是真皮），
7.将真皮剪碎，移至离心管，用0.1%胶原Ⅰ型酶+0.1%胶原Ⅱ型酶+0.1%胶原Ⅳ型酶+ 37℃水浴锅中消化至少2 h（视消化程度而定），
8.用100 μm网筛过滤，
9.取滤液，300 g，离心5 min，
10.用完全培养基重悬沉淀，
11.铺瓶，
12.隔天换液。
以上是皮肤成纤维细胞分离培养的一种方式，不同的技术人员分离培养的方法也不同，使用的试剂比例也不尽相同，皮肤成纤维细胞特异性纤维连接蛋白或波形蛋白表达检测，采用细胞免疫荧光技术。细胞纯度可高达于90%，所有的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
