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技术文章
ELISA(酶联接免疫吸附剂测定）
点击次数：3759 发布时间：2020/1/6 9:17:38
细胞实验、动物实验是科学研究的基础，那么IHC/ICC实验就不可避免。如何设计一个成功的IHC/ICC实验呢？从这篇推文中你将找到答案。
设计一个成功的IHC/ICC实验
免疫组织化学（IHC）和免疫细胞化学（ICC）是用来定位检测抗原表达的技术，其主要原理是利用抗原表位和抗体间的相互作用。IHC使用组织切片，而ICC使用培养的细胞或细胞悬浮液。最后，IHC/ICC均需使用分子标记物(荧光或染料)来得到阳性染色结果。简而言之，先固定样本以保持细胞完整性，再使用封闭试剂孵育该样本，以覆盖抗体可能结合的非特异性位点，最后使用一抗、二抗孵育该样本，并在显微镜下观测信号结果。
从技术上讲，IHC/ICC是相对简单和直接的实验方法。然而，每个IHC/ICC实验都有多个需要优化的变量。最主要的挑战是针对不同抗原，如何优化实验条件，以产生特异性高且信号强的实验结果。例如，在培养的细胞上检测一种高丰度的蛋白，固定时间和封闭时间可能就要缩短，并适合使用荧光偶联的一抗检测。相反，如果在一个冰冻组织切片中检测磷酸化表位，可能需要进行抗原的修复,染色信号也需要放大。
下表列出了影响IHC/ICC的变量和因素，旨在有助于IHC/ICC实验的设计、优化及疑难的解答。
- 影响实验设计和优化的变量
*这些变量还需要对额外因素进行优化包括浓度、pH、温度、孵育时间和稀释度。
该表格并不包含所有细节，但是涵盖了R&D Systems所使用的最常用的IHC/ICC方法。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
