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技术文章
细胞养不好怎么办?看这一篇就够了！图文结合，案例说明
点击次数：3825 发布时间：2019/12/25 8:37:53
细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验，但却不是最简单的。
如果细胞培养状态不好，下一步实验根本就没办法继续。
培养细胞最怕的就是细胞出现污染，发现的早还能清洗一下，加大双抗的用量，换个培养基垂死挣扎一下，发现的晚，细胞基本都飘了，这个时候已经无力回天。
细胞污染分为：
1.物理污染
2.化学污染
3.生物污染
物理污染主要是源于紫外线，温度等物理因素影响。
减少物理污染的方式有：使用质量好的培养箱、保持培养箱不断电，定期维护培养箱等等。这样可以将物理污染控制到一个比较小影响的范围。
化学污染主要是培养器皿的清洁不到位造成的一些洗涤剂的残留，影响细胞的生长。减少化学污染我们平时需要对器皿清洗流程多加注意。首先用去污粉或洗涤剂擦洗；再用自来水冲洗；最后用蒸馏水润洗2～3次，即称“一擦、二洗、三润”。玻璃仪器洗洁净的标志是器壁上附着的水不聚成水滴也不成股流下。
生物污染主要是一些微生物的污染，分为细菌污染、真菌污染和支原体污染。
细菌污染多数情况下培养液会出现：短时间内变黄、明显浑浊现象。
倒置显微镜下观察，可见细胞表面及周围有大量细菌存在，细胞停止生长并可能作为细菌的营养物被“吃掉”。
处理方法：在细菌污染早期建议首先使用PBS清洗，加大抗生素的使用量（5倍），处理0.5-2小时，再消化处理，重新换一个新的培养皿。
但一般只在细菌污染早期有效，污染后期还是建议直接扔掉，避免污染其他细胞。
真菌污染后一般会在培养液中形成淡黄色或是白色的成团絮状物，一般肉眼可见，摇晃一下培养基，会随着培养基一起浮动，倒置显微镜下可以看见细胞之间有纵横交错穿行的丝状菌丝。
处理方法：首先使用PBS多冲洗几次，加大抗生素的使用量（1倍），处理0.5-2小时，更换新鲜培养基，连续处理2－3天。但抗生素对细胞生长影响也很大，如果持续有霉菌长出来建议直接扔掉，不然后期的细胞也会达不到实验的质量。孢子可通过空气散布，最好重新消毒培养箱，污染的细胞单独存放，操作时酒精擦手。
支原体是一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物，是目前发现的最小的最简单的原核生物，能在无生命的人工培养基上生长繁殖。支原体形态多变，在支原体污染较小的时候对细胞生长影响不是很明显，但如果越来越严重将会导致细胞增殖缓慢。甚至从培养器皿脱落。
确认是否有支原体可以做基因诊断:利用DNA探针对支原体诊断其敏感性稍差，但特异性高;用聚合酶链反应(PCR)，敏感性、特异性均高。
清除支原体的方法一般可以使用支原体清除剂，但目前的清除剂并不能达到完全清除支原体的效果，只能抑制到一个支原体影响较小的状态。
有时候细胞背景很干净无明显污染物，但又确实状态不好，那就需要从操作上来找原因了，一般细胞还是比较好养普通的消化传代操作就能维持细胞一个很好的状态，但也有一些细胞需要特别注意一下。
举个例子！
正常的MCF10A是一个上皮样细胞，形态比较规则，但一旦消化过度，他就会大量死亡。
一般新手在消化细胞的时候需要在显微镜下多观察，不像养细胞非常有经验的人，对每一个细胞的生长特性都非常了解。显微镜下观察到细胞有回缩的状况就可以用胰酶轻轻将细胞吹下来终止消化了。
正常的J774A.1S是处于一个圆形的状态，但如果消化操作不当，它的形态就会发生变化呈梭形。
为什么会出现这样的状况呢？
主要是因为J774A.1容易贴壁，如果你在消化传代的时候直接在皿里面终止消化，它很快又会重新贴到皿底，你需要将胰酶消化后的细胞混合液一起加到含培养基的离心管里面终止消化，离心，重悬再铺板，操作过程要迅速。
以上就是关于如何养好细胞，给出的一些解决办法，希望对大家在细胞培养方面能起到帮助。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
