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技术文章
cDNA 第一链合成试剂盒
点击次数：3832 发布时间：2019/12/5 8:30:34
| 产品及特点 | 本试剂盒提供合成 cDNA 第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。 1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。 2. 最长可合成 13 Kb 的 cDNA。 3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。 4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。 5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。 | ||||||||||||||||||||||||
| 规格及成分 |
| 成 份 | 编号 | 十块盒包装 |
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| MMLV（含 RI） | 60906A | 100 uL | |||||||||||||||||||||||
| RT Buffer（含 dNTP） | 60906B | 250 uL | |||||||||||||||||||||||
| Oligo (dT)18 引物(0.5 ug/uL) | 100814 | 50 uL | |||||||||||||||||||||||
| 随机引物(0.2 ug/uL) | 100409 | 50 uL | |||||||||||||||||||||||
| RNase-free 水 | 80403 | 1 mL | |||||||||||||||||||||||
| 使用手册 |
| 1 份 | |||||||||||||||||||||||
| 运输及保存 | 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 | ||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA 1. 按下表配制 RT 反应体系:引物2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。 3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。 4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟。 5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20 uL。 6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。 7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，不需要纯化。 二：合成建文库用的 1st-strand cDNA1. 按下表配制 RT 反应体系:
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。 3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。 4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。 5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。 6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。 7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃长期保存。 三：用对照模板合成 cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟天泽基因联系)
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原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
