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技术文章
烟曲霉探针法荧光定量 PCR 试剂盒 Aspergillus fumigatus. Probe PCR Kit
点击次数：3713 发布时间：2019/12/5 8:13:40
| 产品及特点 | 烟曲霉(Aspergillusfumigatus.)属壳霉目、杯霉科、烟曲霉属，是一种重 要的致病菌，也是引起食品腐败的一种真菌。烟曲霉的菌落生长迅速，绒状或作一定的絮状，暗烟绿色，老后色变得更深。此菌嗜高温，在 45℃或更高的温度下生长茂盛。在粮食发热霉变的中期和后期常大量出现，促进粮温的升高和败坏。 烟曲霉能寄生在人、鸟类及其它脊椎动物的肺部引起结核症。也能侵染棉铃和苹果等，引起果实腐烂，或寄藏于种子上。因此快速检测烟曲霉具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测烟曲霉的试剂盒，它具有下列特点： 1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据烟曲霉高度保守区设计，不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。 5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。 | ||
| 规格及成分 | 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 190303 | 0.5 mL（本色盖） | |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 180701 | 1 mL（亮黄盖） | |
| 烟曲霉 qPCR 引物 | 15-26720yw | 100 μL（白盖） | |
| 烟曲霉 qPCR 探针 | 15-26720pb | 50 μL（棕色管） | |
| 烟曲霉 qPCR 阳性对照 2.0(1×10E8 拷贝/μL) | 60908-26720pc | 50 μL（黄盖） | |
| 天净沙核酸释放剂试用装 | 61202 | 20 次（1mL，绿盖） | |
| 使用手册 | 15-26720sc | 1 份 | |
| 运输及保存 | 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。 | ||
| 自备试剂 | 样品 DNA。 | ||
| 使用方法 | 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。 1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。 2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， | ||
| 下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用 5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用 6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备 7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。 8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数真菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的真菌 DNAout 或柱式真菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。 三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果进行定量分析，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做定性分析则 6 个标准曲线样品只选一个做（可以选 4 号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。 10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后最后加）： | |||
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性对 照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 烟曲霉 qPCR 探针 | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 烟曲霉 qPCR 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 个待测样品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 自备超纯水 | 不加 | 6 μL | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） |
不加 |
不加 | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
| 11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR： 五、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。 13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如 果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。 | |||
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烟曲霉 LAMP 检测试剂盒 | |||
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
