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技术文章
HPLC常见峰形及异常情况
点击次数：5258 发布时间：2019/11/18 11:24:39
上海雅吉生物科技有限公司教您分析HPLC常见峰形及异常情况
一、HPLC
全称高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography），是一种快速的分离分析技术。HPLC具有高效、高速、高灵敏度、适用范围广和流动相选择范围广等特点，因而发展迅速，并在医药、食品、化妆品和农药等很多行业有着广泛的应用。
二、HPLC峰形
HPLC分析过程中，由于各种原因，经常会出现一些异常峰形，严重影响对结果的分析，给实验人员带来很大的困扰。下面介绍一些常见的峰形以及可能的原因：
1. 未出峰
可能的原因：
a. 未成功进样，或样品未溶解进溶剂中，或样品分解变质或样品浓度太低；
b. 仪器本身的问题：泵或者检测器故障；
c. 流动相选择不合适，如对于反相硅胶柱来说，若流动相极性太大，是冲不下来一些小极性的物质的，物质一直保留在柱子中，因而不出峰。
d. 检测器不合适，如：有些产品没有紫外吸收或者吸收很弱，但是检测还使用了UV检测器
2.平头峰
可能的原因：
a. 样品浓度过大或进样体积太大，这个也是大多数原因
b. 检测器设置不正确
可能的原因：
a. 流动相吸收本底值过高
b. 进样过程中进入空气
c. 样品组分的吸收低于流动相
d. 配制样品的溶剂与流动相不一致
4.肩峰
可能的原因：
a. 进样量过大；样品浓度过高
b. 保护柱或色谱柱柱头堵塞
c. 保护拄或色谱柱污染或失效
d. 色谱柱柱头塌陷
5.裂峰
可能的原因：
a. 溶剂效应：溶解样品用的溶剂和起始流动相极性相差太大
b. 保护柱或色谱柱柱头堵塞
c. 保护拄或色谱柱污染或失效
d. 色谱柱柱头塌陷
6.鬼峰
鬼峰（ghost peak）是在某个谱图里出现，可能同样的条件再做一次又不出现了，时有时无的峰。
可能的原因：
a. 进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统
b. 样品中存在未知物，改进样品的预处理
c. 流动相污染，更换新流动相（或者换品牌）；尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤
d. 流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除
7. 前伸峰
可能的原因：
a. 进样量或样品浓度高
b. 溶解样品的溶剂比流动相极性强
c. 保护拄或色谱柱污染或失效
d. 流动相不合适，更换新流动相（调pH或换种类、比例等）
8. 拖尾峰
可能的原因：
a. 进样量或样品浓度高
b. 流动相不合适，更换新流动相（调pH或换种类、比例等）
c. 硅羟基作用：加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值，钝化样品
d. 柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品
e. 色谱柱柱头塌陷或柱效下降：更换色谱柱
注：除以上异常峰形外，HPLC检测过程中，还有很多其它情况，小伙伴们可以从仪器本身、流动相、固定相（色谱柱）、柱温和等度与梯度方法学等方面，调整参数，最终找到一种最合适的HPLC方法。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
