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技术文章
细小病毒 B19 探针法荧光定量PCR 试剂盒
点击次数：3723 发布时间：2019/11/11 9:42:14
产品及特点细小病毒 B19(Parvovirus B19)引起的典型疾病是传染性红斑和急性关节病，在妊娠妇女可引起胎儿水肿乃至死胎。因此快速灵敏检测细小病毒 B19 有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据细小病毒 B19 高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA 发生交叉反应。
5.本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6.本产品只能用于科研。
规格及成分成分编号十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix190303500 μL（本色盖）
荧光 PCR 专用模板稀释液1807011 mL（黄盖）
细小病毒 B19 探针法 qPCR 引
物混合液15-30900yw100 μL（白盖）
细小病毒 B19qPCR 探针15-30900pb100 μL（棕色管）
细小病毒 B19 探针法 qPCR 阳
性对照 (1×10E8 拷贝/μL)60908-30900pc50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）6120220 次（1mL，绿盖）
使用手册15-30900sc1 份
运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂样品 DNA。
使用方法一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， 下同）。
3.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所
得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct
值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
关联产品细小病毒 B19 可视化 LAMP 检测试剂盒
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
