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技术文章
超高效感受态细胞制备试剂盒
点击次数：3699 发布时间：2019/10/24 9:50:05
产品介绍
Speed E.coli Transformation Kit 可实现快速转化的感受态细胞制备试剂盒，适用于实验室
多种菌株，特别是 DH5α, JM109, DH10B, XL1-Blue 等。特殊的感受态试剂配方，使转化效率
可达到108-5X109cfu/ug pUC19 DNA, 转化整个过程不需冰浴、热激和孵育等步骤，最快 30 秒
即可实现完美的转化。
产品特色
转化快：最快可 30 快速转化，不需冰浴、热激和孵育步骤
效率高：达到 10
8
-5X10
9
cfu/ug pUC19 DNA
稳定性好：-70℃冰箱可保存一年时间
安全性高：不需液氮处理，直接超低温冻存即可
操作步骤
以 50ml 的 E.coli 培养体积为例
感受态细胞制备操作步骤
1. 将 0.5ml 新鲜过夜培养的 E.coli 菌接种于 50ml SOB 培养基中（1:100 比例接种），在摇
床中以 25℃，250 rpm 条件下振荡培养，直至 OD600nm达到 0.4-0.6。
★注意: 在 25℃，250 rpm 振荡培养可提高感受态细胞的效率；制备感受态的 E.coli
菌株应处于生长的对数期，即 OD600nm达到 0.4-0.6，大于 0.6 时的细菌状态变差，小于
0.4 时细菌量较少，均不适合制备感受态细胞。
2. 将第一步中的 E.coli 培养基转移至冰上，冰浴 10 分钟预冷细菌。然后在 4℃条件下，
3000rpm 离心 10 分钟。
★注意：制备感受态细胞时所有步骤都要在低温条件下进行，操作时动作要轻柔，不可 剧烈
地处理 E.coli 菌体。
3. 弃去离心后的上清，加入 15ml E.coli Competent Buffer, 轻柔地重悬细菌沉淀；重复
实验步骤 2 的操作。
4. 彻底地弃去上清，加入 5ml E.coli Competent Buffer，轻柔地重悬细菌沉淀。
5. 在冰上以 100ul 或200ul 的体积分装 E.coli 的悬浮液，直接冻存感受态细胞至-70℃超
低温冰箱中（勿用液氮处理感受态细胞）。
转化步骤
多种转化形式可选：30 秒极速转化；5 分钟快速转化；常规转化
保存条件
低温运输，4℃保存，有效期 12 月
注意事项
1. E.coli 菌株影响感受态效率
不同的菌株制备的感受效率差异不同，像 DH5α,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold,
TG1 等菌株，使用 Speed E.coli Transformation Kit 制备的感受态效率较高。
2. 菌株培养条件
菌株培养时，用营养更丰富的 SOB 培养基；在 25℃，250rpm 振荡培养，会使 E.coli
菌处于最佳生长状态，更适宜用于制备感受态细胞
3. 预热平板可提高转化效率
在转化前，将 4℃保存的平板转移到 37℃培养箱中预热一段时间，可提高转化时的效率。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
