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技术文章
口蹄疫病毒通用 RT-PCR 检测试剂盒
点击次数：3661 发布时间：2019/10/21 9:15:36
产品及特点 口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)会引发口蹄疫，最易
感染的动物是黄牛等；野生动物也易感染此病。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及
南美均有流行，口蹄疫发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱，
高烧不退，使实际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可传染给人。因
此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、
难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”，因此快速灵敏诊断具有
重要意义。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测口蹄疫病毒。
它具有下列特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据口蹄疫病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间
转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分 成 份 编号 十孔盒包装
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 91202a 200 μL（橘黄盖）
MMLV-Taq Mix 91202b 75 μL（红盖）
超纯水 100935 1 mL（亮黄盖）
口蹄疫病毒通用 RT-PCR
引物混合液 13-17700yw 100 μL（白盖）
口蹄疫病毒通用 RT-PCR
阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）
13-17700pc 50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装） 61202a 20 次（1mL，绿盖）
使用手册 13-17700sc 1 份
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的
DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分
分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性
对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用口蹄疫病毒通用 PCR 阳
性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对
照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提
取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装，其使用手
册可以在本公司网站 www.tiandz.com 上输入产品名称天净沙核酸释放剂或
产品编号 61202 下载。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是
RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中
加入下列成分：
成份 N+2 个
样品管
RT-PCR
阴性对照
RT-PCR
阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL
口蹄疫病毒通用 RT-PCR
引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - -
超纯水 - 12.5 μL -
口蹄疫病毒通用 RT-PCR 阳性对照
的 1000 倍稀释液 - - 12.5 μL
MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL
4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:
过程 温度 时间
逆转录 42℃ 30 min
预变性 95℃ 5 min
PCR 反应
（35 个循环）
95℃ 30 sec
58℃ 30 sec
72℃ 30 sec
延伸 72℃ 7 min
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，
则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、
阳性对照有扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果。预期的 PCR
产物长度为 328bp。如果有预期扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
关联产品 口蹄疫病毒通用可视化 RT-LAMP 检测试剂盒
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
