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技术文章
大豆源性成分探针法PCR检测试剂盒
点击次数：3824 发布时间：2019/9/4 13:35:50
产品及特点 本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有大豆的成分。现代食品加工工艺极大
改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已
经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的
快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足
这一需求根据探针法 qPCR 原理开发的产品，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据大豆保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的大豆成分，但不能
检测其他非大豆成分。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
6. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.01%，对样品中大豆成分的核酸检测下限
为 0.1ng/µL。
7. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的荧光定量 PCR。
规格及成分 成分 编号 十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix 190303 1 mL（棕色盖）
荧光 PCR 专用模板稀释液 180701 1 mL（黄盖）
大豆源性成分探针法 qPCR
引物混合液 15-502yw 100 uL（白盖）
大豆源性成分 qPCR 探针 15-502pb 50 uL（棕色管）
大豆源性成分探针法 qPCR 阳性
对照（1×10E8 拷贝/uL）
60908-502pc 50 uL（黄盖）
天净沙核酸释放剂试用装 61202 20 次（1mL，绿盖）
使用手册 15-502sc 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较
高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
自备试剂 DNA 模板
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标
准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本
试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分
震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，
充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，
充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对
照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的天净沙核酸释放剂
试用装，则请到 www.tiandz.com 输入产品名称天净沙核酸释放剂或编号 61202
下载手册并按手册操作，制备样品。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上
步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲
线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个
用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于
PCR 阳性对照（用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板）。下
面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：
成分
样品管
N+2 个
PCR 阴性
对照管
标准曲线
样品管（2-7 管）
2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL
大豆源性成分探针法 qPCR 探针 1 μL 1 μL 各 1 μL
大豆源性成分探针法 qPCR
引物混合液 2 μL 2 μL 各 2 μL
N+2 个待测样品 DNA 模板 7 μL 不加 不加
超纯水 不加 7 μL 不加
第 7 步所得标准曲线样品稀释液
（2-7 号）
不加 不加
各 7μL（2 号样到 2
号管，3 号样到 3 号
管…）
四、qPCR 反应参数
过程 温度 时间
预热 50℃ 2 min
预变性 95℃ 15 min
PCR 反应
（40 个循环）
95℃ 15sec
60℃ 60sec（采集 FAM 通道的荧光信号）
五、数据处理
11. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵
轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的
log 值，再推算出其浓度。
12. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等
于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于
30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为
阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则
为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
