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技术文章
培养细胞单细胞悬液的制备
点击次数：3848 发布时间：2019/7/24 9:20:44
实验材料胰蛋白酶细胞
试剂、试剂盒EDTA·2NaPBS
仪器、耗材离心管
实验步骤
一、培养细胞的特征
一般细胞培养分为悬浮培养和贴壁培养，由于细胞的增殖有可能形成大小不等的细胞团块或连接成片。如果两个或多个细胞粘连在一块或细胞碎片过多都将影响 FCM 结果，进而导致实验失败。所以，制备合格的培养细胞单细胞悬液十分重要。
二、培养细胞样品的制备程序
1. 将培养细胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根据室温情况而定），至光镜下见到贴壁细胞间出现筛状间隙为止，弃去消化液，加 PBS 液。
2. 用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，并移入离心管中。
3. 短时低速离心，即 800~1000 r/min，5 min。
4. 弃上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml，低速短时离心，800~1000 r/min 离心 3~5 min；重复 2~3 次，以去除细胞悬液中的细胞碎片。
5. 加少许 PBS 液，将沉淀细胞轻轻吹打均匀。加固定液或低温保存待用。
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