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技术文章
RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞简介
点击次数：3783 发布时间：2019/5/27 8:58:08
培养操作及注意事项说明
一．产品简介
1、细胞名称：RAW264.7；小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
2、生长特性： □ 贴壁 □ 悬浮 □半悬浮半贴壁
3、细胞生长条件：
培养条件 DMEM(高糖）+10% FBS+1%双抗
温度 37℃
空气条件 5% CO2,95% AIR
传代方法 1:2 传代，2~3 天换液
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
4.背景资料：此细胞株源自 BALB/c 小鼠由 Abelson 鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。
可产生溶菌酶；sIg-, Ia-，Thy-1.2-。为检测到病毒颗粒的分泌，XC 斑点形成试
验阴性。该细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖；可以经抗体依赖分
裂绵羊红细胞与肿瘤靶细胞；LPS 或 PPD 处理 2 天可诱导分裂红细胞，但对肿
瘤靶细胞无作用。 二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2
细胞培养箱中静置 3-4 小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养
或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用
PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后
将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 12ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传
代，最后放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用
PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待
细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将
悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转
入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃
水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm
离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2
细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
附:
T25 瓶细胞处理方法
收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即
时联系。并进行以下操作：
1. 75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。
2. 将细胞放入 37 度培养箱中预温 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。
3. 预热培养基（含 10%胎牛血清，1%双抗）。
4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。
5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的 5-6ml 培养基。
放到 37 度培养箱培养。待细胞密度达到 80%以上，进行传代。
②若细胞密度较大，达到 80%以上，将细胞传代培养。 注：
培养瓶里的培养基血清浓度为 5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程
中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬
浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加 15%血清的完全培养基到新的培养
皿/瓶继续培养 3 天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为 15%血清的完全培养基。（这
里是针对原来完全培养基 FBS 浓度是 10%的情况，如果原来 FBS 浓度是 20%，可以增加
到 25%FBS 浓度） 收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系并
提供图片，以便售后处理。7 天内反馈，细胞本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际
情况酌情处理；7 天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
