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技术文章
第一链合成试剂盒(RNase H-)
点击次数：3967 发布时间：2019/4/18 8:17:14
II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)，即BeyoRT™II First Strand cDNA Synthesis Kit (RNase H minus)，是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)，用于以总RNA、mRNA等为模板反转录合成cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR也称定量
PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。
使用本试剂盒可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以超过10 kb。在采用BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)的情况下，由于缺失了RNase H酶活性，RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解，这样反转录出来的cDNA的长度就会更长，并且产量更高。
图1. 使用本试剂盒对总RNA反转录后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。
本试剂盒中的BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)热稳定性高，最适反应温度为42-45℃，但当温度达到50℃时仍具有很高活性，且可获得较高产量的cDNA。
试剂盒中提供了RNase Inhibitor，确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。
试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物，前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录，后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时，不同包装的本试剂盒足够分别进行20个，100个及500个cDNA第一链样品的合成。
包装清单：
产品编号产品名称包装
D7168M-1BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-)100μl
D7168M-2Reaction Buffer (5X)0.5ml
D7168M-3RNase Inhibitor (20U/μl)100μl
D7168M-4dNTP Mix (10 mM each)200μl
D7168M-5Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl)100μl
D7168M-6Random Hexamer Primer (0.2μg/μl)100μl
D7168M-7DEPC-treated Water1.5ml
—说明书1份
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
对于GC含量比较高的RNA的反转录，产品的使用说明中都给予了特别说明，请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
