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技术文章

原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

点击次数:3995 发布时间:2019/2/25 8:18:16

实验方法原理苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。

实验材料细胞样品
试剂、试剂盒苏丹红Ⅲ70%乙醇甲醛CaCl2明胶蒸馏水甘油苯酚
仪器、耗材盖玻片水浴锅载玻片显微镜
实验步骤
一、配制试剂:
1. 苏丹红Ⅲ染色液:将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用;
2. 甲醛钙固定液:将10ml甲醛和1g CaCl2混合加水至100ml;
3. 甘油明胶:将12g明胶加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解,再加入60ml甘油和1g苯酚,充分混匀后即得。于4℃储存备用;
二、染色步骤:
1. 用Hanks液漂洗盖玻片3次;
2. 用甲醛钙固定液固定20min;
3. 用蒸馏水漂洗盖玻片3次;
4. 用70%乙醇将盖玻片冲洗3次;
5. 用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品,染色10—30min;
6. 用70%乙醇漂洗盖片3次;
7. 用甘油明胶封片后观察;
三、结果:
原代细胞含脂类的区域呈橘红色;
收起
注意事项
在染色时,要保证时间防止染色不彻底,颜色不明显。

原创作者:上海雅吉生物科技有限公司

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