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技术文章
细胞传代操作步骤
点击次数：4660 发布时间：2018/11/12 8:42:23
细胞传代操作步骤
一、贴壁细胞传代
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1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
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2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
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3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
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4.用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
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5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
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1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
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2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
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3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
注：
培养瓶里的培养基血清浓度为5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基。（这里是针对原来完全培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度） 收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，请当天反馈并提供图片，且保存前三天照片以便分析。7天内反馈，细胞本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际情况酌情处理；7天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
