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技术文章
Walker256细胞
点击次数：3935 发布时间：2018/10/23 9:00:32
Walker256复苏与传代
- 细胞复苏：
- 在液氮中取出冻存管
- 置于39℃水浴中，迅速溶化
- 用2ml注射器吸取细胞悬液，注射到Wistar大鼠腹腔中
1．准备1只雌性大鼠，100-110g（120g以上的大鼠很难有腹水）
2．待第7天左右开始密切观察大鼠的腹水及存活情况，如果活力佳，有明显移动性腹水，可以放腹水2次左右；一旦发现大鼠活动受限，要立即处死取腹水；
3．一般每次可以收取20-60ml（甚至更多）。
- 腹水采集与传代分成两类:活着抽取腹水和处死抽取腹水
制备大鼠腹水流程：
1.活着抽取腹水
1） 将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好（左手固定）
2） 酒精消毒整个腹水鼠腹部
3） 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内（在腹部中线旁刺入空隙，勿扎住内脏）
4） 抽取腹水
5） 用灭菌生理盐水稀释腹水，细胞计数器计数，使细胞总数在1×107个／ml
6） 如果是传代室温放置就行，要是接瘤必须准备碎冰盒，把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面
2.处死抽取腹水
1）将walker256腹水鼠脱臼处死，75%酒精棉球将腹部消毒
2）用已灭菌的眼科剪，剪开腹部皮层(只剪皮层，不剪肌肉层)
3）暴露腹部肌肉，将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好（左手固定）
4） 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内（在腹部中线旁刺入空隙，勿扎住内脏）
5） 抽取腹水
6）用灭菌生理盐水稀释腹水，细胞计数器计数使细胞总数在1×107个／ml
7）如果是传代室温放置就行，要是接瘤必须准备碎冰盒，把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面
注意事项：
每次取腹水的时候，可以观察一下：
1．腹水收集少的大鼠，肠壁、内脏和腹壁上是否有实体瘤，如果有说明注射方式和细胞数目还是有问题；
2． 收集的是血性腹水（红色）还是非血性腹水（黄色），一般血性腹水的产量低。这和杂交瘤的种类和注射有关。
3．可以仔细观察大鼠注射杂交瘤后的存活期和腹水产量，实体瘤产生、血性腹水之间的关系。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
