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技术文章
ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书
点击次数：3543 发布时间：2023/3/1 9:06:01
ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC4770
规格：50T/24S
产品内容：使用请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体 60 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体 80 mL×1 瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体 20 μL×1 支 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体 1.5 mL×1 支 | -20℃保存 |
| 试剂五 | 粉剂×1 支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1 、 试剂二：临用加入 3 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反 复冻融；
2 、 试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用根据样本量按试剂三 (μL)：蒸馏水 (mL) = 1 μL:12 mL 的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在 4h 之内用完；
3 、 试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。 临用根据样本量按试剂四：试剂一 (V:V) = 1:9 的比例配成试剂四工作液，现配现用，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。
4 、 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有 5 mg 维生素 C 。临用加入 2.8 mL 提取液，充分振荡溶解； 配成 10 mmol/L 维生素 C 溶液，用于阳性对照。2-8 ℃可保存两周。
5 、 ABTS 工作液的配制：临用根据样本量按试剂一：试剂二：试剂三工作液 (V:V:V) =76:5:4 的比例配成 ABTS 工作液，现用现配，室温避光保存，务必在 30 分钟内使用。
产品说明：
ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用广泛的间接检测方法。ABTS 经氧化后生成稳 定的蓝绿色阳离子 ABTS 自由基，在 405 nm 或 734 nm 处有吸收峰。被测物质加入 ABTS 自由基溶液后，所 含抗氧化成分能与 ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色，405 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变 化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除 ABTS 自由基的能力。
ABTS H2O2、POD ABTS·+ (405 nm) Antioxidants ABTS
注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛、冰、蒸 馏水。
操作步骤：
一、样本处理 (可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)
1、植物组织样本的制备：将新鲜样本置于 60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎 (或粉碎机粉碎)，过 30~50 目筛； 称取约 0.05 g 样本，加入 1 mL 提取液后置于 40℃水浴锅中浸提 30 min ；10000 rpm 室温离心 10 min ，取上清， 置于冰上待测。
2 、红酒、果汁等液体样本：吸取 100 μL 样本溶液加入 900 μL 提取液，旋涡振荡混匀，室温 10000 rpm 离心
10 min ，取上清，置冰上待测。
3 、提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
注意：不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，为实验结果的准确性，样本要根据预实验结果 进行适当调整 (如清除率大于 90% ，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于 5% ，建议加大烘干样本 质量或液体样本体积进行提取)。
二、测定步骤
1 、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 405 nm ，蒸馏水调零。
2 、阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将 10 mmol/L 的维生素 C 溶液用提取液配制成 1 、0.8 、0.6 、0.4、
0.2、0. 1 mmol/L 的维生素 C 溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为 90%的阳性对照，则建议将 10 mmol/L 维生素 C 溶液用提取液配制成大于 1.5 mmol/L 的维生素 C 溶液待用。
| 序号 | 稀释浓度 (mmol/L) | 维生素 C 溶液体积 (µL) | 提取液体积 (µL) | 稀释后浓度 (mmol/L) |
| 1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
| 2 | 1 | 160 | 40 | 0 8 |
| 3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
| 4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
| 5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
| 6 | 1 | 20 | 180 | 0.1 |
备注：实验中每个标准管需 50µL 维生素 C 溶液。
3 、操作表：在 EP 管中分别加入下列试剂：
| 试剂名称 (μL) | 空白管 | 测定管 | 对照管 | 阳性对照管 |
| 上清液 | - | 50 | 50 | - |
| 不同浓度的 VC 溶液 | - | - | - | 50 |
| 蒸馏水 | 50 | - | - | - |
| 试剂四工作液 | 100 | 100 | - | 100 |
| ABTS 工作液 | 850 | 850 | - | 850 |
| 试剂一 | - | - | 950 | - |
| 充分混匀，室温避光静置 6 min 。测定 405 nm 处的吸光度。分别记为 A 空白、A 测定、A 对照、A 阳性对 | ||||
| 照，阳性对照标准曲线和空白管只需测 1-2 次。 |
三、ABTS 自由基清除率的计算
1. 阳性对照的自由基清除率计算公式：
ABTS 自由基清除率 DVC% =[(A 空白-A 阳性对照)÷A 空白]×100%。
2. 样本的自由基清除率计算公式：
ABTS 自由基清除率 D% =[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100%。
注意事项：
1、不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的 ABTS 自由基清除能力，建议对 于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物 (或者药物) 配制成同 样浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度 (相同稀释倍数) 的清除率大小。
2 、样本建议当天提取当天检测。
实验实例：
1 、 取 0.05 g 辣椒加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，计算清除率得： D% = [A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100% =[1.330-(0.468-0.022)]÷ 1.330×100% = 66.466%。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
