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技术文章
检测细胞凋亡注意事项及常见问题2022科研资讯更新
点击次数：3340 发布时间：2022/11/21 9:11:05
注意事项：
1，PI有潜在的致癌性，操作时清特别注意并采取必要的防护措施。
2，Annexin V，FITC和PI均对光敏感，所有染色过程和培养过程均需避光。
3，诺细胞收集过程中使用胰酶，需设法去除残留的胰酶，这些胰酶会消化并讲解Annexin V，FITC，终导致染色失败。
常见问题：
Q1:贴壁细胞凋亡实验是否能够不消化？
A1：不选择消化的原因是什么？
主要是担心胰酶对细胞膜损伤而影响结果判断。
贴壁细胞在检测凋亡之，如果没有出现团聚的情况，那么是可以尝试不消化直接镜检。理由是基于Annexin V- FITC与细胞反应的一个机理，凋亡早期的膜磷脂酰丝氨酸由膜内外翻，与Annexin V特异性结合，那么FITC标记的Annexin V呈现一个绿色荧光，所以我们证足够的细胞膜暴露在工作液中，那即使没有经过胰酶消化，终也是能够用荧光显微镜观察凋亡的情况。
不消化有几点好的地方：
1.避免一个对细胞膜的损伤，那结果能够很好的反应促凋亡的结果
2.操作简便，避免消化以及清洗过程中出现的操作失误
不消化有几点担心的地方：
1.无法制成细胞悬液，染色可能出现不充分
2.可能无法观察凋亡晚期PI和FITC双染的细胞
Q2:目用Tunel的检测试剂盒做凋亡实验。和Tunel比较，用Annexin V-FITC的优点是什么？
A2: TUNEL这种方法灵敏度很高，但是特异性比较低，只能标记出凋亡中期和凋亡晚期的细胞，而且细胞坏死也会发生DNA断裂，不能算是真正的凋亡细胞，造成假阳性的现象。
建议老师两种方法都进行，以Tunel方法为主，Annexin V的方法为辅，这样两种方法都进行，互相也可以验证结果是否准确，互作参考。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
