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技术文章

CCK8检测耐药细胞株耐药株PC9R吉非替尼药物的耐药作用

点击次数：3447 发布时间：2022/10/26 9:50:22

CCK8 检测耐药细胞株耐药株 PC9R 吉非替尼药物的耐药作用
细胞：PC9R、PC9
药物：吉非替尼
仪器与试剂：CCK8 试剂 日本同仁；
分光光度计 TECAN
实验过程：
一：细胞培养
PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%双抗（青链霉素混合液）的 DMEM 培养基，置于 37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。显微镜下观察细胞状态。
二、吉非替尼药物贮藏液的配置
向已称好样本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀释成 50mmol/L 的浓度，使 用再稀释弄所需的使用浓度。
三、CCK8 试验
1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的细胞悬液（2000–3000 cells/孔）。将培养板在培养 箱预培养 24 小时 ( 在 37℃， 5% CO2 的条件下 )。
2. 向培养板加入 10 ul 八个浓度（0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM）的待测药物。
3. 将培养板在培养箱孵育 24 小时。
4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值 的读数，斜着培养板壁加，不要插到培养基液面下加) 。加入后轻轻振摇培养板。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

四、 IC50 结果计算

1、仪器导出原始数据

吸光度检测

通道

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

检测波长

A

450 nm

B

1.001

0.881

0.915

0.686

1.951

1.422

1.315

1.314

1.209

2.044

C

1.226

1.254

1.166

0.581

2.273

1.503

1.478

1.508

1.112

1.973

检测日期

D

1.57

1.544

1.543

0.522

1.929

1.661

1.803

1.743

1.143

2.145

2019/8/1

E

1.691

1.787

1.717

0.487

0.239

1.943

1.858

1.796

0.93

0.232

F

1.811

1.769

1.838

0.399

0.234

1.941

1.859

1.896

0.857

0.244

检测时间

G

2.094

1.838

1.905

0.525

0.25

2.077

1.903

1.963

0.851

0.232

16:07:31

H

加样备注：

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

PCR

PC9R

B

12.5uM

12.5uM

12.5uM

25uM

0uM

12.5uM

12.5uM

12.5uM

25uM

0uM

C

6.25uM

6.25uM

6.25uM

25uM

0uM

6.25uM

6.25uM

6.25uM

25uM

0uM

D

3.125uM

3.125uM

3.125uM

25uM

0uM

3.125uM

3.125uM

3.125uM

25uM

0uM

E

1.5625uM

1.5625uM

1.5625uM

50uM

空白

1.5625uM

1.5625uM

1.5625uM

50uM

空白

F

0.78125uM

0.78125uM

0.78125uM

50uM

空白

0.78125uM

0.78125uM

0.78125uM

50uM

空白

G

0.390625uM

0.390625uM

0.390625uM

50uM

空白

0.390625uM

0.390625uM

0.390625uM

50uM

空白

H

2、计算结果

亲本株

浓度(uM)

50

25

12.5

6.25

3.125

1.5625

0.78125

0.390625

抑制百分比

(%)

87.32965

80.36832

61.80479

46.16943

27.55064

17.64273

13.53591

5.819521

耐药株

浓度(uM)

50

25

12.5

6.25

3.125

1.5625

0.78125

0.390625

抑制百分比

(%)

64.61313

49.46828

38.70554

30.67473

17.51008

10.35937

8.544188

4.015402


原创作者：上海雅吉生物科技有限公司

CCK8检测耐药细胞株耐药株PC9R吉非替尼药物的耐药作用

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