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技术文章
多重PCR扩增PCR Mix-2×RAPA3G Multiplex PCR Mix2022更新
点击次数：3357 发布时间：2022/9/28 9:58:52
| Multiplex PCR又称多重PCR，是指在同一PCR反应体系里加上两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个域，特别适用于微量样本的多位点检测。 RAPA3G Multiplex PCR Mix（多重PCR Mix）使用具有超强扩增性能的热启动RAPA3G DNA聚合酶和优化的多重PCR反应缓冲液，使其可有效扩增20重以上的PCR，具有高的灵敏度，大程度上减少了反应体系优化步骤。 | ||
特征 | ||
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储存 | ||
| 期储存置于-20°C以下，可保存2年，避免反复冻融；短期使用置于4°C（3个月）保存，一经融化后请放置于4°C，勿再冻存。 | ||
反应实例 | ||
| 1. 应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix进行20重PCR扩增；用0.1ng、1ng、10ng和100ng的人基因组分别扩增30和35个循环，4%的琼脂糖凝胶，80V电泳300min，如图所示该Multiplex PCR Mix对不同量的模板具有很好的兼容性，且灵敏度可至0.1ng。 | ||
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| 2.应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix分别用不同的模板进行20重PCR扩增，泳道1-5分别为：1μl抗凝全血分离的白细胞（相当于5μl抗凝全血）、1μl抗凝全血、1μl血清、1μl含50ng human gDNA的血清和50ng human gDNA， 结果显示RAPA3G Multiplex PCR Mix具有较强的抗杂质能力，对于全血等样品也能较好的扩增。 | ||
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| 3.应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix和Supplier A和 Supplier B的同类产品进行15重PCR扩增，比较如下图，可见RAPA3G Multiplex PCR Mix扩增性能较其他同类产品具有卓的扩增性能。 | ||
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注意事项 | ||
| 1.当模板GC含量>70%时，请添加5×Q-Solution（Cat. No.: A3002）。 2.推荐引物设计原则：引物长度保持在22 - 30 bp，扩增产物长度在2kb以下，GC含量50% - 60%，尽量减少各引物之间TM的差值。 3.检测单引物特异性：多重PCR反应，应对设计的引物逐一扩增，以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。 4.引物推荐使用浓度：推荐扩增片段<300bp每条引物的反应终浓度为0.2-0.3μM，扩增片段>300bp每条引物的反应终浓度为0.05-0.15μM，如某些目标片段产量偏低或偏高，可适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。 5.反应需将引物制成10×Primer Mix：预先混合所有扩增引物，使每条引物浓度为0.5 ~3 μM。 | ||
常见问题及解决方案 | ||
| 1. 扩增产物少或没有扩增。 (1) 降低退火温度（每个梯度降低1℃）。 (2) 增加模板量 (3) 增加PCR循环数。 (4) 增加退火时间为90 sec，必要时可延长退火时间至3 min。 (5) 增加引物使用量。 2. 存在非特异性扩增。 (1) 减少循环数，提高退火温度（每个梯度降低1℃）。 (2) 减少引物使用量。 (3) 重新设计引物。 3. 电泳时条带模糊。 (1) 减少循环数(每次减少3个循环)。 (2) 减少起始模板量。 (3) 延长彻延伸步骤时间至15 - 30 min。 (4) 减少退火时间。 |
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
