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技术文章
流式细胞术常见样本的制备与保存
点击次数：3385 发布时间：2022/7/27 9:21:50
外 周 血 或 骨 髓
1. 保存方法
收集样本后置于加有抗凝剂（一般选择肝素或EDTA）的试管中，室温保存，尽量在12 h内处理样本；若无法及时处理，4℃保存，此时好选择肝素抗凝管。
2. 处理方法
一般不需要特殊处理制备单细胞悬液，所用试剂为淋巴细胞分离液和红细胞裂解液。但在临床检测中，为了避免细胞成分丢失，通常不推荐使用淋巴细胞分离液分离单核细胞。
3. 抗凝剂的选择
血液标本可以使用EDTA、ACD（枸橼酸葡萄糖）或肝素抗凝。
一般认为，ACD和肝素抗凝的样本72 h内细胞是稳定的；EDTA抗凝48 h内是稳定的，但超过24 h则认为不是很好了。
EDTA适用于白细胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系细胞贴壁造成细胞损失，并具有较强的抗血小板凝集能力，但对细胞活性的保持不如肝素抗凝。同时EDTA是二价阳离子的强螯合剂，会影响与Ca2+相关的抗原位点（如CD11b等），并会抑制与Ca2+相关的细胞功能。肝素常用于白细胞功能研究，可维持Ca2+和Mg2+在细胞内的生理浓度，更好保持细胞活性，适用于放置时间较长、不能及时检测的样本，但不适合血小板的相关检测。
骨髓样本优先选择肝素抗凝。
体 液
1. 保存方法
收集样本后置于肝素抗凝管中，室温保存，尽量在12 h内处理样本；若无法及时处理，4℃保存，保存时间不要超过48 h。
2. 处理方法
a. 样本1000-1500 rpm离心5 min，弃去上清；
b. 加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS），离心洗涤5 min；
c. 加入适量PBS重悬。如有细小沉淀，用300目尼龙网过滤后备用。
组 织
1. 保存方法
切取新鲜组织样本置于生理盐水或PBS中，室温保存，尽量在12 h内处理样本；若无法及时处理，4℃保存，保存时间好不要超过48 h。不建议用甲醛、乙醇固定细胞，不要用酶、表面活性剂处理细胞。
2. 处理方法
常用的组织样本制备单细胞悬液方法有：机械法、酶处理法、化学试剂处理法及表面活性剂处理法，在流式分析中，为保持抗原活性，多采用机械法处理样本。采用机械法需注意动作轻柔，尽量减少细胞的损伤。
若实验室无单细胞制备仪，手工剪切制备单细胞悬液：
a. PBS清洗组织样本，去除大量红细胞；
b. 用眼科剪将组织剪成小块，再次PBS清洗；
c. 组织小块加入匀浆器中，加少量PBS匀浆；
d. 用细注射针头抽取细胞悬液；
e. 300目尼龙网过滤；
f. 加入含0.1%牛血清白蛋白的PBS；
g. 1000-1500 rpm离心5 min，弃去上清；
h. 加入适量PBS重悬。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
