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技术文章
糜蛋白酶（Chymotrypsin）试剂盒
点击次数：3314 发布时间：2022/7/15 9:35:15
分光光度法 50管/48样 注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。 测定原理： 糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237 nm有特征光吸收；通过测定237 nm 光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用加入50 mL蒸馏水充分溶解。 粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 测定步骤： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到237 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入100μL试剂一，1000μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A空白管。（从吸光值稳定增加开始计时） 4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入100μL粗酶液，1000μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A测定管。（从吸光值稳定增加开始计时） 注意：空白管只需要测定一次。 糜蛋白酶活性计算公式： （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。 糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定管－△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V1)÷T =2.75×(△A测定管－△A空白管)÷Cpr Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.1 mL；V反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。 （2）按照样本质量计算 活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。 糜蛋白酶（U/g鲜重）=(△A测定管－△A空白管) ×V反总÷(W×V1÷V2)÷T =2.75×(△A测定管－△A空白管)÷W W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.1 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。 注意事项： 临用配制的试剂配置好后3天内使用完毕。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
