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技术文章
实验检测方法大鼠NRP1ELISA检测试剂盒
点击次数：2703 发布时间：2021/9/13 16:00:16
简单操作步骤：
（1）、将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原；
（2）、加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗-体复合物；
（3）、加酶标抗抗体；
（4）、加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
储存及有效期：
未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。
使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
实验原理：
将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入微生物化的目标抗体，将未结合的生物素抗体洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。
精密度：
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差: CV<10% Inter-批间差: CV<13%
稳定性：
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
友情提醒：
试剂盒使用完毕后，请妥善处理相关耗材，避免环境污染！
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
原创作者：上海仁捷生物科技有限公司
