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糖原合成酶检测试剂盒微量法操作程序

发布时间:2021/4/27 19:54:43关注度:2925

糖原合成酶检测试剂盒微量法操作程序

测定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需要的仪器,耗材:

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

测定意义:

GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

糖原合成酶检测试剂盒微量法操作程序
样本处理
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。

细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 200w,超声 3 ,间隔 7 ,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

血清等液体:直接检测。

原创作者:上海仁捷生物科技有限公司




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