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发布时间:2021/4/25 20:09:52关注度:2878
山梨醇脱氢酶测试盒操作步骤
测定意义:SDH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脱氢生成果糖,是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之。
测定原理:SDH催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性
需要的仪器,耗材:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
样本处理
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个):提取液体 积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴, 功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000 ×g 4℃离心 10 min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液), 进行冰浴匀浆。8000 ×g 4℃离心 10 min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样本:直接检测。
原创作者:上海仁捷生物科技有限公司
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