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发布时间:2021/4/8 19:54:17关注度:2949
产品说明: ACK广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其 是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。 测定原理如下:(1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+ 速率,即可反映ACK活性。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品: 台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、 冰、蒸馏水。
样本处理
1、细菌或细胞处理: 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或 细胞(功率 20%,超声 3 ,间隔 10 ,重复 30 次),15000g,4℃,离心 20 分钟,取上清,置冰上待测。
2、组织处理: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 20 分钟,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆):直接检测。
原创作者:上海仁捷生物科技有限公司
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