测定意义：FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。

需要的仪器，耗材:研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤：

、粗酶液提取： 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心 40min，取上清置于冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细 胞加入 1mL 试剂），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，总时间 3 分钟）； 然后 16000rpm，4℃离心 40min，取上清置于冰上待测。

二、FAS 测定操作： 1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min 以上。 3. 空白管：在 500μLEP 管中依次加入 20μL 蒸馏水、4μL 试剂二、4μL 试剂三、164μL 试剂四和 8μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。 4. 测定管：在 500μLEP 管中依次加入 20μL 上清液、4μL 试剂二、4μL 试剂三、164μL 试剂四和 8μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为 A1和A2。△A 测=A3-A4。

三、FAS 活性计算： 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1） 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6] ÷(Cpr×V 样)÷T=1.61×(△A 测定管 –△A 空白管) ÷Cpr


（2） 按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.61×(△A 测定管 –△A 空白管) ÷W

（3） 按细胞数量计算 活性单位定义：37℃中每 10 4个细胞每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 测 定 管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 总 ×10 6] ÷( 细 胞 数 量 ×V 样 ÷V 样 总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量 ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V 样：加入反应体系中上清液 体积，20μL=0.02mL；T：反应时间，1min。


使用 96 孔板测定的计算公式如下：

（1） 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6] ÷(Cpr×V 样)÷T=3.22×(△A 测定管 –△A 空白管) ÷Cpr

（2） 按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3.22×(△A 测定管 –△A 空白管) ÷W

（3） 按细胞数量计算 活性单位定义：37℃中每 10 4个细胞每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 测 定 管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 总 ×10 6] ÷( 细 胞 数 量 ×V 样 ÷V 样 总)÷T=3.22×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量 ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V 样：加入反应体系中上清液 体积，20μL=0.02mL；T：反应时间，1min。

原创作者：上海仁捷生物科技有限公司