ELISA操作注意事项如下：（1） 加样：在ELISA中除了包被外，一般需进行4～5次加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样1滴。此时应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出现气泡。（2） 孵育：在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加结合物后，此时反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器最好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将平板放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热容易。如用保温箱，空湿盒应预先放在其中，以平衡温度，这一步骤在室温较低时更为重要。加入底物后，反应时间和温度通常不做严格要求。（3） 洗涤：洗涤在ELISA过程中虽不是反应步骤，但却是决定成败的关键。洗涤的目的是洗去反应中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。（4）显色及终止反应：显色是酶促反应，应按规定的温度和时间操作，用酸终止。（5） 结果判断：用比色计测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度和比色计的质量。




检测范围所需试剂和器材： 　
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水

组成及试剂配制
1：预包被板: 96T/48T
2：酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3：标准品: -6 0.5mL x 2
4：EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5：标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6：显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7：终止液: 1N 12mL x 1
8：浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1


1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

样品收集、处理及保存方法：

1）血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
RJ18610猪三碘甲状腺原氨酸(T3)elisa试剂盒
RJ19696犬骨碱性磷酸酶(BALP)ELISA试剂盒
RJ18588猪葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)ELISA试剂盒
RJ11636人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒
RJ17533小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒
RJ16418大鼠血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)ELISA试剂盒
RJ18282猪白介素5(IL5)ELISA试剂盒
RJ13376人硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)ELISA试剂盒
RJ17020小鼠促红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒
RJ20371鸡胆碱(Choline)ELISA试剂盒
RJ15887大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA试剂盒
RJ13502人内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒
RJ14687人异质性胞核核糖核蛋白A3(hnRNPA3)ELISA试剂盒
RJ19725犬激动异构酶;细胞分裂素MB(CKMB)ELISA试剂盒
RJ15716大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒
RJ14933人桩蛋白(Pax)ELISA试剂盒
RJ20020绵羊免疫球蛋白G2a(IgG2a)ELISA试剂盒
RJ14914人转化生长因子β2(TGF-β2)ELISA试剂盒
RJ15172大鼠B淋巴细胞趋化因子1(BLC1)ELISA试剂盒
RJ13045人抗上皮细胞生长抑制因子(APF)ELISA试剂盒
RJ19220牛乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒

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