操作步骤：

、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液） 进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。 2、细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，总时间 3min）；16000g，4℃离心 20min， 取上清液置冰上待测。 3、血清等液体：直接测定。

二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2、 试剂在25℃水浴中保温30min以上。 3、 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂和100μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定 吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。ΔA空白管=A1-A2。（空白管只需做1~2个） Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: /82 Http://www.solarbio.com第2页，共 2 页 4、 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂和100μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定 吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。ΔA测定管=A3-A4。



ADH活性计算

（1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH (U/mg prot) =[(ΔA测定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反总×10 6] ÷(Cpr×V样)÷T =1.61×(ΔA测定管–ΔA空白管) ÷Cpr

（2）按样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH (U/g 质量) =[(ΔA测定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反总×10 6 ] ÷(W×V样÷V样总)÷T =1.61×(ΔA测定管–ΔA空白管)÷W

（3）按细胞数量计算 活性单位定义：25℃中每10 4个细胞每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH (U/10 4 cell) =[(ΔA测定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反总×10 6 ] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =1.61×(ΔA测定管–ΔA空白管) ÷细胞数量

（4）按液体体积计算 活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH (U/mL) =[(ΔA测定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反总×10 6] ÷V样÷T=1.61×(ΔA测定管–ΔA空白管) ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001L； V样总，加入提取液的体积，1mL；10 6：单位换算系数，1mol=1×10 6μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W： 样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；T：反应时间，1min；细胞数量：以万计

原创作者：上海仁捷生物科技有限公司