检测原理

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

　　试剂盒性能

　　1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

　　2. 灵敏度：检测浓度小于0.1 U/mL。

　　3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

　　4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

　　5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

　　6. 有效期：6个月

　　结果判断

　　绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

　样品收集、处理及保存方法

　　1. 样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

　　2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

　　3. 植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。

　　4. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

　　洗板方法

　　1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

　　2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

　　大鼠钙结合蛋白(CR)elisa试剂盒操作步骤

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

　　3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

　　4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

原创作者：上海仁捷生物科技有限公司