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突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9-718操作步骤
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更新日期：2025/12/1 21:23:03
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
陈**
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详细内容
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
细胞名称 突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使PLC/PRF/5细胞稳定表达突变型的Cas9蛋白，该蛋白可以降低基因编辑时的脱靶效率，经2.0ug/ml Puromycin筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 10%FBS；2.0ug/ml Puromycin
传代方法 1:2~1:6传代；2~3天换液1次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR Amelogenin：X,X；CSF1PO：10,10；D12S391：15,20；D13S317：11,12；D16S539：13,13；D18S51：17,17；D19S433：11,13；D21S11：30,33.2；D2S1338：19,22；D3S1358：15,15；D5S818：12,12；D6S1043：13,21；D7S820：9,11；D8S1179：13,16；FGA：19.2,25；Penta E：10,16；TH01：8,8；TPOX：8,8；vWA：15,16；
同工酶
染色体
使用权限 A类
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。
6. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
英文名称：21,23:24,25-Diepoxy-21,23- dimethoxytirucall⁻⁷-en-3-oneCAS：1351617⁻⁷4⁻⁷ (13alpha,14beta,17alpha,20S,21R,23R,24S)-24,25-环氧基-23-羟基-23-甲氧基-3-氧代羊毛甾⁻⁷-烯-21-醛环 21,23-(甲基乙缩醛)用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C32H50O5纯度：≥95%植物来源：
英文名称：21,23:24,25-Diepoxy-21,23- dimethoxytirucall⁻⁷-en-3-oneCAS：1351617⁻⁷4⁻⁷ (13alpha,14beta,17alpha,20S,21R,23R,24S)-24,25-环氧基-23-羟基-23-甲氧基-3-氧代羊毛甾⁻⁷-烯-21-醛环 21,23-(甲基乙缩醛)用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C32H50O5纯度：≥95%植物来源：
英文名称：21-Deoxyneridienone BCAS：924910-83-821-去氧基欧奕二烯酮用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C21H28O3纯度：≥98%植物来源：
英文名称：2-Desoxy-4-epi-pulchellinCAS：122872-03-12-去氧-4-epi-天人菊灵用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C15H22O3纯度：≥95%植物来源：
英文名称：2α,24-Dihydroxyursolic acidCAS：143839-02-52,24-二羟基熊果酸用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C30H48O5纯度：≥95%植物来源：
英文名称：3-(2,4-Dihydroxyphenyl)propionic acidCAS：5631-68-53-(2,4-二羟基苯)丙酸用途：本品用于含量测定，药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告，因为品质是企业的决战场，是基业长青的保证，我公司提供的一切产品仅供科研，实验室用，不得用于注射，食用或者其他用途。公式：C9H10O4纯度：≥90%植物来源：
M0028溶菌酶（蛋清）/脆壁质酶/球蛋白G/N-乙酞胞壁质聚糖水解酶/Lysozyme(Chinken egg)，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，12650-88-32～8℃BR，2万u/mg5克
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，25克
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，100克
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，1公斤
中文名称： 溶菌酶（蛋清） ，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，标准品，7万u/mg1克
其他中文名称： 脆壁质酶；球蛋白G；N-乙酞胞壁质聚糖水解酶
英文名称： Lysozyme(Chinken egg)
其他英文名称： Glycanohydrolase；Mucopeptide-N-acetylmuramoylhydrolase；Lysozgme chloride；Muramidase
产品规格： BR，2万u/mg
包装： 5克/25克/100克/1公斤
CAS号：12650-88-3
级别：BR
分子量：14300
活力：≥20000u/mg
PH：3.5～6.5
水分：≤5.0%
灰分：≤4.0%
总氮量：15～17%
微生物指标：合格
性状：冻干粉。从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。它富含碱性氨基酸，有4对二硫键维持酶构型，是一种碱性蛋白质，其N端为赖氨酸，C端为亮氨酸。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐热的酶，适宜pH5.3～6.4
突变型Cas9稳定表达的人肝癌细胞；PLC/PRF/5-mCas9⁻⁷18操作步骤用途：生化研究。是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。
保存：2～8℃
ＡＴＣＣ细胞
