1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,⁻⁷0℃保存。
shgoy-2572硫酸镉Platinum
shgoy-2573溴化镉Platinum
shgoy-2574碳酸镉Platinum tetraiodide
shgoy-2575氢氧化镉Platinum(IV) oxide
shgoy-2576碘化镉Cadmium
shgoy-2577硫化镉Cadmium
shgoy-2578乙酸镉Cadmium bromide
shgoy-2579盐酸二肼Cadmium carbonate
shgoy-2580N-乙酰肼Cadmium hydroxide
shgoy-25813-氨基二甲酰肼Cadmium iodide
shgoy-2582盐酸肼Cadmium sulfide
shgoy-25833-羟基-2-萘甲酰肼Cadmium acetate dihydrate
shgoy-2584顺丁烯二酰肼N-Acetylphenylhydrazine
shgoy-2585水合肼Hydrazine dihydrochloride
shgoy-2586肼Hydrazine monohydrochloride
shgoy-25874-叔丁基茴香醚3-Hydroxy-2-naphthoic hydrazide
shgoy-2588异丙醚Phenylhydrazine
shgoy-2589锑粒Antimony
shgoy-2590锑块Antimony
shgoy-2591三氧化锑Antimony(III)oxide
shgoy-2592三氧化二锑Antimony(III)chloride
shgoy-2593Arsenazo I
phospho-NRP1(Thr916)磷酸化神经纤毛蛋白1抗体
NF11型神经纤维瘤抗体
phospho-NF1(Ser2515)磷酸化1型神经纤维瘤抗体
NUDEL中心粒蛋白Nudel抗体
phospho-NDEL1(Ser231)磷酸化中心粒蛋白Nudel抗体
NSDHL类固醇脱氢酶样蛋白NSDHL抗体
Phospho-NFKB1(Ser373)磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
phospho-NF1(Ser2817)磷酸化1型神经纤维瘤抗体
Phospho-NMDAR2B (Tyr1474)磷酸化谷氨酸受体2B抗体
Phospho-NFKB1 (Thr931)磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
Phospho-NFKB1 (Ser907)磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
Phospho-NFKB1 (Ser337)磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
Phospho-NFKB1 (Ser893)磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
Phospho-NFKBIA (Tyr42) 磷酸化IKB α抗体
pdTTP 溶液,2.5mM2mL包装hospho-NFKBIA(Tyr305)磷酸化IKB alpha抗体
phospho-NFATc2(Ser330)磷酸化核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体
NOX5还原型辅酶Ⅱ氧化酶5/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸抗体
NANOS2生殖细胞增殖相关蛋白NANOS2抗体
NFKB p52细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体
Phospho-NFKB2(Ser866+Ser870)磷酸化细胞核因子/k基因结合核因子p100抗体
NAT2N-乙酰基转移酶2抗体
NALP2富含亮氨酸重复结构域蛋白2抗体
NR2C2孤儿核受体TAK1抗体
Nanos3骨巢蛋白抗体
Netrin 5轴突生长诱向因子5抗体
phospho-NFKBIA(Ser32/36)磷酸化p-IκB-α抗体
G21 proteinG21蛋白质抗体
NQO1醌氧化还原酶抗体
NPY1R神经肽Y1受体抗体
dTTP 溶液,2.5mM2mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。