1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,⁻⁷0℃保存。
shgoy-9876-甲基并吡喃酮6-MethylcoumarinBR,98%M8264625克
shgoy-9884-甲基伞形酮4-MU试剂级,92%M82647100克
shgoy-989助壮素Mepiquat chloride高纯,99%M826481克
shgoy-990脱叶灵TDZ高纯,99%M8264950毫克
shgoy-991生根粉Rooting PowdeARM826502.5KU
shgoy-992花宝1号 N-P-K(7-6-19)超纯,99%M826511KU
shgoy-993花宝2号N-P-K超纯,99%M826525毫克
shgoy-994花宝3号N-P-K生物技术级,95%M826531毫克
shgoy-995花宝5号N-P-K生物技术级,98%M826545毫克
shgoy-996玉米素核苷Trans-zeatin RibosideBR,99%M82655500u
shgoy-997茶精PPT高纯,99%M826561.2KU
shgoy-998(+)-儿茶素(+)-Catechin hydrate高纯,98%M82657500U
shgoy-9991,3-二甲基黄嘌呤Theophylline高纯,98%M826582KU
shgoy-1000百草敌Dicamba高纯,95%M82659250毫克
shgoy-1001乙酸-1-萘酯α-Napthyl acetate超纯,98%M826601克
shgoy-1002乙酸-2-萘酯β-Napthyl acetate高纯,98%,无水物M826615克
shgoy-1003黄素腺嘌呤二核甙酸二钠FAD-Na2超纯,98%,二水物M82662100u
shgoy-1004三氯杀螨醇Dicofol高纯,98%,无水物M826631ku
shgoy-10053-氨基-1,2,4-三氮茂3-AT超纯,98%,三水物M826641克
shgoy-1006莠去津Atrazine超纯,100mMM826655克
shgoy-1007除草剂Basta超纯,99%M826665毫克
shgoy-1008异戊烯基腺嘌呤核苷2iP Riboside超纯,99%M8266720毫克
shgoy-10091-甲基-3-基-5-(3-三氟甲基基)-4(1H)-吡啶酮Fluridone高纯,95%M82668150u
shgoy-10102-甲基-1-嘧啶-5-基-1-(4-三氟甲氧基基)丙-1-醇Flurprimidol高纯,98%M826691KU
shgoy-1011草甘膦Glyphosate高纯,98%M826701KU
TTC21B四聚体多肽蛋白21B抗体
Tropomyosin原肌球蛋白1抗体
TEF3转录增强因子TEF3抗体
Transcription factor 25核转录因子25抗体
Tau protein微管相关蛋白抗体
Trk A + B + C酪氨酸激酶A/B/C抗体
TBX2新型抑癌基因抗体
Transferrin转铁蛋白/血清铁传递蛋白抗体
TNFSF4肿瘤坏死因子配体超家族成员4抗体
TNFSF14肿瘤坏死因子配体超家族成员14抗体
TNFSF18肿瘤坏死因子配体超家族成员18抗体
TNFRSF14肿瘤坏死因子受体超家族成员14抗体
Phospho-Tie2 (Tyr992)磷酸化血管生成素受体2抗体
TAK1转化生长因子β活化激酶1
随机引物法 DNA 探针标记试剂盒5次包装Phospho-TAK1(Ser412)磷酸化转化生长因子β活化激酶1
Phospho-TAK1(Thr184)磷酸化转化生长因子β活化激酶1
Phospho-TAK1(Thr187)磷酸化转化生长因子β活化激酶1
Phospho-Tie2 (Ser1119)磷酸化血管生成素受体2抗体
phospho-TPH(Ser19) 磷酸化色氨酸羟化酶抗体
TNIKTRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体
phospho-TNIK (Ser764)磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体
phospho-TNIK (Ser769) 磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体
phospho-TSC1(Ser505)磷酸化结节性硬化症蛋白1抗体
phospho-TPH (Ser260)磷酸化色氨酸羟化酶抗体
TPA组织型纤溶酶原激活剂抗体
TBRG1转化生长因子β调节蛋白1抗体
phospho-Tau protein(Ser416)磷酸化微管相关蛋白抗体
TLR6Toll样受体6抗体
随机引物法 DNA 探针标记试剂盒5次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。