1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,⁻⁷0℃保存。
shgoy-5326原生质酵母细胞转化试剂盒M7971420次
shgoy-5327电击法酵母细胞转化试剂盒M7971520次
shgoy-5328酵母菌落直接PCR检测试剂盒M7971620次
shgoy-5329酵母细胞溶解试剂盒M7971720次
shgoy-5330酵母细胞冻存试剂盒M7971850次
shgoy-5331酵母菌YPD培养基M79719100毫升
shgoy-5332酵母菌YPD培养基M79720500毫升
shgoy-5333酵母菌DOB培养基M79721100毫升
shgoy-5334酵母菌DOBA培养基M79722100毫升
shgoy-5335酵母菌YNB培养基M79723100/500毫升
shgoy-5336酵母菌YNBA培养基M79724100毫升
shgoy-5337酵母菌SD-G培养基M79725100毫升
shgoy-533810倍酵母菌SD-G培养基M79726100毫升
shgoy-5339酵母菌SD-GAL/RAF培养基M79727100毫升
shgoy-534010倍酵母菌SD-GAL/RAF培养基M79728100毫升
shgoy-5341酵母菌SD-LEU/TRP培养基M79729100毫升
shgoy-534210倍酵母菌SD-LEU/TRP培养基M79730100毫升
shgoy-5343酵母菌SD-LEU培养基M79731100毫升
shgoy-534410倍酵母菌SD-LEU培养基M79732100毫升
shgoy-5345酵母菌SD-TRP培养基M79733100毫升
shgoy-534610倍酵母菌SD-TRP培养基M79734100毫升
shgoy-5347酵母菌SD-HIS培养基M79735100毫升
shgoy-534810倍酵母菌SD-HIS培养基M79736100毫升
shgoy-5349酵母菌SD-URA培养基M79737100毫升
shgoy-535010倍酵母菌SD-URA培养基M79738100毫升
Homo sapiens (Human)再生胰岛衍生蛋白3γ(REG3γ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)异连蛋白β(DTNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)脊椎蛋白1(SPON1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)互联蛋白神经元中间丝蛋白α(INα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)Lin-28同源物A(LIN28A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)受磷蛋白(PLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)再生胰岛衍生蛋白3γ(REG3γ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)兰尼定受体1(RYR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)核因子I/B(NFIB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
一站式全血 mRNAout25 次包装Homo sapiens (Human)R-脊椎蛋白1(RSPO1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)神经颗粒素(NRGN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)桥粒联结蛋白(AHNAK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)前列腺蛋白类脂肪酶B(LIPB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)早老素1(PSEN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)血管非炎性蛋白1(VNN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CAMK2α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)拓扑异构酶Ⅱβ(TOP2β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)再生胰岛衍生蛋白3γ(REG3γ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)异连蛋白β(DTNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)脊椎蛋白1(SPON1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)互联蛋白神经元中间丝蛋白α(INα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)Lin-28同源物A(LIN28A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)受磷蛋白(PLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
一站式全血 mRNAout25 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并最大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。